人类多发性骨髓瘤恶性相关基因C1orf35的功能和作用机制研究

多发性骨髓瘤（MM）是一种浆细胞恶性增生性血液肿瘤，瘤细胞具有极强的遗传不稳定性，导致染色体数量和结构的异常。我们从MM细胞株ARH-77中克隆到一个与MM恶性相关的基因C1orf35，定位于染色体1q42.13。前期研究表明，该基因能促使NIH3T3细胞转化；促进细胞生长、增殖；能促使细胞由G1向S期转换；体内实验证明，该基因具有促进肿瘤形成的潜能；生物信息学分析提示C1orf35蛋白具有转录因子的基本结构。这些结果说明C1orf35基因在MM的发生发展过程中具有非常重要的作用，但它到底是如何发挥调控的机制却不甚明了。本项目通过研究深入阐明C1orf35基因表达导致细胞恶性转化的分子机制及其在信号转导中的作用；同时对C1orf35基因在MM中的转录调控进行分析，以期找到C1orf35的下游调控靶基因，阐明MM发病的分子机制，为MM的诊断和治疗提供新的思路。

我们首次发现一个新的肿瘤相关基因C1orf35在MM病人中表达上调，并再次实验证明该基因表达上调与MM密切相关。在这一重要发现的基础上，进一步研究C1orf35基因表达上调的分子机制及其对MM发生、发展的影响。.1. 使用RT-PCR技术检测MM患者骨髓细胞中C1orf35的表达状态，发现MM患者骨髓单个核细胞中C1orf35基因表达上调（68.9%）；而正常健康成人外周血单个核细胞中未检测到该基因表达。.2. 构建慢病毒干扰载体GV248/C1orf35-RNAi，建立稳定表达的NIH3T3/C1orf35-RNAi的细胞株。采用real-time PCR和Western blot检测细胞中C1orf35的表达水平，结果显示，C1orf35在mRNA水平及蛋白水平均表达下调。C1orf35基因被干扰后能明显减缓细胞增殖。.3. 对NIH3T3/C1orf35-RNAi细胞株中c-myc基因表达进行检测，发现c-myc的表达在基因水平及蛋白水平均下调，表明下调C1orf35基因的表达后，能同时下调细胞内c-myc基因的表达水平，C1orf35可能通过c-myc依赖的途径发挥作用。 .4. 通过干扰及过表达C1orf35基因以研究对MM细胞增殖的影响，结果显示，C1orf35基因被干扰后能明显减缓细胞增殖，而当过表达C1orf35基因后，细胞增殖速度显著加快。.5. 生物信息学分析发现，C1orf35定位于细胞核，可能在细胞核中发挥转录调控作用，参与某些癌基因的转录激活。采用染色质免疫共沉淀（ChIP）方法，对C1orf35蛋白与原癌基因c-myc启动子区的结合进行检测。结果显示，C1orf35与c-myc基因启动子区-226~-10 bp处结合。.6. 为明确C1orf35在MM细胞中参与的细胞信号转导途径，采用免疫共沉淀（Co-IP）结合质谱的方法对C1orf35的相互作用蛋白进行检测。样品经处理和SDS-PAGE分离后，切下差异条带进行质谱鉴定。结果显示，C1orf35蛋白和c-myc蛋白之间不存在直接的相互作用，C1orf35的相互作用蛋白可能为一些在细胞核与细胞浆之间穿梭的蛋白，如核不均一核糖核蛋白、蛋白精氨酸甲基转移酶、核磷蛋白等。其具体的作用模式有待进一步研究。.本项目达到了预期目标，这些发现为深入阐明MM发病的分子机制提供了重要的实验依据