HCMV感染调控神经前体/干细胞HOXB1表达机制

先天性人巨细胞病毒（HCMV）感染致胎儿畸形尤其是中枢神经系统发育畸形机制尚未阐明。本课题组利用人神经前体/干细胞（NPCs）研究发现，伴随HCMV感染诱发的NPCs分化异常，与神经发育密切相关的HOXB1水平上调。本项目拟构建HOXB1启动子荧光素酶报告系统，研究HCMV感染对基因启动子转录活性影响。在此基础上采用UV-灭活处理或添加蛋白质/核酸合成抑制剂，研究不同时相病毒蛋白对HOXB1表达水平影响。监测野生/突变病毒蛋白表达载体转染或基因缺失突变病毒感染引起的荧光素酶活性变化，筛选、鉴定调控HOXB1基因表达的病毒蛋白。构建不同缺失/突变HOXB1启动子报告系统，辅以DNaseI足迹、ChIP和EMSA试验，确定病毒蛋白调控HOXB1基因表达的分子基础。为进一步探讨先天性HCMV感染致胎儿中枢神经系统畸形机制提供新思路，为临床干预提供新的理论基础。

1. 主要科学贡献：.本项目首次系统的研究了来自于不同胚龄分离的人神经前体细胞（NPCs），经体外传代，如短期的passage3-6代，和长期的passage11-20代，它们之间对病毒感染和自身特性变化的差异。结果显示胚龄的不同对HCMV感染引起的细胞形态变化、CPE进程、病毒蛋白表达等都没有显著影响。然而，伴随着后期传代NPCs分化的开始，病毒进入细胞能力和病毒滴度均逐渐提高。这些结果不仅进一步证实了NPCs细胞是HCMV感染完全允许性细胞，而且也揭示了NPCs分化使得其对HCMV感染更敏感，提示胎脑发育成熟度的不同可能是病毒感染临床后果差异性的主要原因之一。这一研究不仅可以更规范于以NPCs为模型的HCMV感染机制研究，而且还可以更好的为HCMV临床诊断提供指导作用。整个项目共计发表论文5篇，其中两篇发表在JVI（病毒学领域顶级杂志）上。.2. 培养了2名硕士研究生，1名博士研究生。