枣果实真菌种类鉴定及内生真菌与果实病害关系研究

近年来枣果实病害种类和危害程度不断增加，严重时可造成绝产绝收。已报道的11种果实病害中同病异名和同菌异名现象普遍。另外同一种病害如枣缩果病的病原在不同地区相继报道了9种真菌；一种病原如链格孢被报道导致六种枣果实病害。枣果实病害病名和病原种类的混乱和不确定性，给该类病害的预测、防治及学术交流带来了障碍。前期研究发现枣内生真菌种类几乎包含了所有已报道的枣果实病原真菌种类。为了科学规范病害名称，准确鉴定枣果实病害及明确枣果实内生真菌与枣果病害的关系，本项目利用PCR-SSCP技术结合传统分离鉴定及多基因序列鉴定相结合的手段，对枣树果实真菌物种多样性进行系统研究，建立果实真菌资源库，同时测定其致病性和相互关系，准确鉴定枣果致病菌种类，全面了解其症状表现及变化，明确传统概念内生菌中哪些是潜伏的病原菌，哪些是无致病性的具拮抗活性或中性的内生菌；为枣果实病害的准确鉴定、致病规律和科学防治研究奠定基础。

近年来枣果实病害种类和危害程度不断增加，严重时可造成绝产绝收。已报道的11 种果实病害中同病异名和同菌异名现象普遍。另外同一种病害如枣缩果病的病原在不同地区相继报道了9 种真菌；一种病原如链格孢被报道导致六种枣果实病害。枣果实病害病名和病原种类的混乱和不确定性，给该类病害的预测、防治及学术交流带来了障碍。为了科学规范病害名称，准确鉴定枣果实病害及明确枣果实内生真菌与枣果病害的关系本项目进行了以下研究。.本项目从六种不同症状病果上共分离鉴定出8种病原真菌。这些病原在不同时期都可导致软腐病、黑斑病，炭疽病、褐斑等其他报的的病害症状。枣果病害症状受环境，品种，接种时期影响而变化。建议枣果病害命名以病原加典型症状的方式命名。如枣壳梭孢软腐病，枣层出镰刀菌软腐病，枣尖孢镰刀菌软腐病，枣链格孢黑斑病，枣茎点霉褐斑病，枣链格孢轮纹斑病和枣炭疽病。首次发现并证明层出镰刀菌和尖孢镰刀菌可引起枣田间软腐病。首次发现并证明枣链格孢轮纹斑病。2013年9月于河南省新郑市枣园采集健康的白熟期灰枣枣果进行组织分离，共分离到菌株78株，对其进行形态鉴定和分子鉴定，确定为9属16种，鉴定出一个新种Diaporthe henanense，2个我国新记录种Diaporthe infecundaC.Glienke和Simplicillium cylindrosporum .本实验从30个健康枣果中提取总DNA,特意扩增真菌ITS1区序列,基于Illumina MiSeq测序平台， 构建小片段文库进行双末端测序。通过对Reads拼接过滤，OTUs聚类，并进行物种注释及丰度分析，揭示样品中真菌物种构成.结果表明，从近30000万个Reads中拼接过滤的OTUs,有99%以上的序列信息和网上已报到物种序列对不上。说明枣果实存在大量未知不可培养的真菌。和枣上已分离鉴定的内生真菌相比，通过枣果实内基因OTUs获得的真菌种类多于枣上已分离鉴定的内生真菌数。.枣果内生真菌的潜在致病性分析.在本实验中分离得到的6个种的真菌：链格孢、细极链格孢、尖孢镰刀菌、层出镰刀菌、胶孢炭疽菌和头状茎点霉，均被报道过能引起枣果实病害，可以认为是潜在致病菌。