卵圆细胞恶性转化模型中Wnt/Notch信号串扰及其机制研究

信号串扰在肿瘤干细胞中的作用是当今肿瘤学的研究热点。我们前期研究发现，在肝癌组织中调控干细胞自我更新及分化的两条信号通路Wnt/β-catenin和Notch表达异常且存在串扰，并与肝癌组织的分化程度相关。基于上述发现，我们提出假设：Wnt信号通路和Notch信号通路发生串扰异常可能是影响肝干细胞恶性转化为肿瘤干细胞并最终导致肝癌的重要因素。本项目拟在卵圆细胞（肝干细胞）恶性转化的体内和体外模型中分别检测Wnt/β-catenin信号通路和Notch信号通路上的关键信号分子，以明确在卵圆细胞恶性转化过程中此两条通路存在的表达异常；并且通过基因转染和RNA干扰等方法分别上调和下调其中一条通路同时检测另一条通路关键分子的表达变化，探寻两条信号通路串扰的关键点；进一步运用IP,EMSA及ChIP等方法检测相关蛋白与核酸间的相互作用以探索发生串扰的分子机制。该研究具有深入了解肝癌发生机制的理论意义

该研究设计目标为：在卵圆细胞恶性转化后，通过免疫组化、real time-PCR， Western blot等技术检测WNT及Notch的表达变化，观察WNT及Notch信号通路对卵圆细胞恶性转化的影响，并应用RNA干扰技术对其作用进行验证，目的在于探讨在肝干细胞恶性转化过程中信号通路的作用，为深入了解肿瘤的发生机制提供理论依据，也为将肝干细胞最终纳入组织工程并应用于临床奠定基础。经过各个阶段的研究工作，我们基本完成预先设定的研究工作计划，通过建立OC3、WB-F344细胞（大鼠肝卵圆细胞系）体外恶性转化模型，观察转化细胞中Wnt/β-catenin信号通路和Jagged-1/Notch-1信号通路的变化；并证实这两条通路在WB-F344细胞中存在串话。我们得到结论：在肝干细胞发生恶性转化的过程中，Wnt及Notch1/Jagged1信号通路发生活化；而经典Wnt信号通路的异常激活及Notch1/Jagged1信号通路共同参与肝干细胞导致肝癌发生的过程。