miR-424通过IGF-1R调控子宫内膜癌EMT的作用机制研究

Endometrial carcinoma is the most common malignant tumor in gynecology, the mortality is steadly increasing over the past twenty years. miRNA plays an important role in EMT of endometrial carcinoma. The mechanism of miRNA expression dysregulation in endometrial carcinoma may be DNA methylation or dysregulation of transcription factor. We have verified that suppression of IGF-1R expression in endometrial carcinoma can inhibit cells proliferation, promote cells apoptosis and restain the phosphorylation of Akt and Erk, which is the dowmstream protein of IGF-1R pathway. It is reported that IGF-1R is closely related to EMT in endometrial carcinoma. miR-424 is one of miRNAs which regulates and controls IGF-1R expression.We hypothesize that miR-424 expression is decreased in endometrial carcinoma by promoter methylation or dysregulation of transcription factor, which leads to the target gene IGF-1R loss of control and increased expression, further promotion of dowmstream protein phosphorylation and activation of PI3K/Akt and MAPK/Erk signal pathway, which results in the occurrence of EMT. Our research can supply theoretical basis and experimental evidence for exploring the mechanism of miR-424 decreased expression in endometrial carcinoma, meanwhile supply theoretical basis for miR-424 used as a new treatment and prognosis target spot for endometrial carcinoma.

子宫内膜癌是最常见的妇科恶性肿瘤，其死亡率在过去20年里稳定上升。miRNA在子宫内膜癌EMT中发挥重要作用。子宫内膜癌中miRNA表达失调的可能机制为DNA甲基化和转录因子失调。我们前期研究证实，抑制子宫内膜癌细胞中IGF-1R的表达，可抑制细胞增殖，促进凋亡，并抑制IGF-1R通路中下游蛋白Akt、Erk的磷酸化。有研究证实，IGF-1R与肿瘤EMT发生密切相关。而miR-424是预测的调控IGF-1R的miRNA。我们提出：具有抑瘤功能的miR-424可能因启动子甲基化、转录因子失调在子宫内膜癌中表达下降，使其直接靶基因IGF-1R失调控而表达增加，继而促进下游蛋白的磷酸化，从而活化PI3K/Akt、MAPK/Erk信号通路促进EMT的发生。本研究为深入探讨miR-424在子宫内膜癌中表达下调的机制提供理论依据和实验证据，为miR-424作为新的子宫内膜癌治疗和预后靶点提供理论依据。

子宫内膜癌是最常见的妇科恶性肿瘤，其发病率位列妇女恶性肿瘤第四位，死亡率位于女性生殖系统恶性肿瘤第二位。目前子宫内膜癌的发病机制尚不明确。研究表明子宫内膜癌的发生都与表观遗传机制相关。而表观遗传学改变主要包括：DNA 甲基化、组蛋白修饰及 miRNA。研究表明，miRNA的异常表达与子宫内膜癌的细胞周期、增殖、侵袭及 EMT密切相关。最新的研究也提示IGF-1R 参与肿瘤 EMT。 . 我们的前期研究已证实，抑制子宫内膜癌细胞中 IGF-1R 的表达,可抑制细胞增殖，促进细胞凋亡，体内抑制移植瘤生长，并抑制 IGF-1R 通路中下游蛋白 Akt、Erk的磷酸化。我们通过在线软件 Targetscan 预测了能与IGF-1R 3’UTR 直接结合的 miRNA，并证实 miRNA-424在子宫内膜癌中表达下降，可通过与 IGF-1R 3’UTR 直接结合并抑制 IGF-1R 的表达。.为了探讨具有抑瘤功能的miRNA-424子宫内膜癌中表达下降，使直接靶基因 IGF-1R失调控而表达增加，继而通过 PI3K/Akt、MAPK/ERK 信号通路促进 EMT 的发生的机制，我们进行如下实验内容，①验证在子宫内膜癌中 IGF-1R 是否为miRNA-424 的直接靶基因；②研究miRNA-424 在子宫内膜癌中表达下降的机制 ③ 验证 IGF-1R 是否参与子宫内膜癌细胞 EMT ④验证子宫内膜癌中 miR-424 是否通过 IGF-1R调控EMT。. 研究发现miR-424 在子宫内膜癌中的表达显著下降。在细胞水平上我们也证实这个结果。通过转染miRNA-424-mimic或者miRNA-424-inhibitor到子宫内膜癌细胞检测与EMT相关蛋白的表达，结果提示转染miRNA-424-inhibitor使得侵袭相关蛋白如Vimentin表达增加，细胞增殖及侵袭力更强。对转染miRNA-424- inhibitor的细胞再次转染靶向IGF-1R的慢病毒调节的siRNA, 则逆转了上述结果。同时我们也证实IGF-1R与miRNA-424呈负相关。. 以上结果均表明，miRNA-424有望成为子宫内膜癌治疗的靶点。