特异性microRNA在重症急性胰腺炎胃肠动力障碍中的鉴定及功能研究

重症急性胰腺炎（SAP）病情凶险，病死率高，患病率有上升趋势。胃肠动力障碍（GID）通过增加"腹腔间隔室综合征"和"二次打击"几率，增加SAP的死亡率。要降低其死亡率，早期判断SAP和改善SAP中的GID就很重要。最近研究表明miRNA 可能与SAP中出现GID有关，但这些研究有明显不足："研究的miRNA较少；对特异性miRNA 的作用机制未做研究"。本研究通过基因芯片、定量PCR和原位杂交法，鉴定出特异性miRNA，可能成为早期判断SAP的有效工具之一；通过观察慢病毒构建pre-miRNA 载体和miRNA LNA Knockdown 探针上调或下调目标miRNA，从体外和体内来调节消化道起搏细胞ICC的c-KIT基因表达、离子通道及电生理变化等，探讨特异性miRNA对胃肠平滑肌动力的调节机制。为在SAP中以特异性miRNA为靶标的治疗，降低SAP死亡率，提供良好的理论基础和实验参考。

重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis， SAP）往往病情凶险、病死率高、住院时间长、治疗花费昂贵。SAP中出现胃肠动力障碍（gastrointestinal dysmotility, GID）是一个普遍的临床表现，其可影响多方面因素导致急性期SAP的病死率增加。近来关于miRNA研究也揭示其与SAP及SAP中出现GID密切相关。本项目主要通过以下三个方面研究miRNA在重症急性胰腺炎胃肠动力障碍中的鉴定及功能。一、应用基因芯片、定量PCR和原位杂交法鉴定出SAP患者血清中特异性miRNA，并证明其对早期SAP及急性胰腺炎严重程度判断的价值；二、将特异性miRNA转染消化道起搏细胞ICC，通过上调与下调miRNA的表达检测ICC的c-KIT基因的表达、离子通道及电生理变化，探讨特异性miRNA对胃肠平滑肌动力的调节机制；三、构建SAP动物模型，并通过尾静脉注射特异性miRNA，观察SAP大鼠c-KIT基因的表达、胃肠动力变化。其主要研究结果为：一、和健康对照组相比，急性胰腺炎患者血清中miR-92b, miR-10a, and miR-7的表达显著降低，并且发现miR-551b-5p在SAP中表达相比轻症急性胰腺炎（mild acute pancreatitis MAP）明显增加，最终实验结果分析表明miR-55 1b-5p对AP严重程度的鉴别具有重要意义。二、进一步的实验表明重症胰腺炎相关性MiR-551b-5p可使ICC细胞内钙离子浓度显著增加，可能参与细胞内钙离子激活通路的传导和调节，而其对于ICC中c-KIT基因的直接调控作用未有明显的统计学意义。三、成功构建SAP大鼠模型，通过膜片钳、肌条实验等发现SAP大鼠中其胃肠蠕动慢波明显减少，细胞内钙离子内流明显减少。这些实验研究在SAP中以特异性miRNA为靶向治疗，降低SAP死亡率，提供良好的实验及理论基础，为治疗SAP开辟了新的途径。