TFF3结合蛋白的验证及其介导胃癌细胞转移侵袭机制研究

三叶因子是近年来发现的小分子多肽，其主要参与胃肠道粘膜的屏障保护和修复。但近年研究发现TFF3与胃肠道肿瘤发生相关，具体机制不详。生理状态下TFF3在胃粘膜中不表达，我们前期研究发现其在胃癌中高表达同时有TR3的高表达，且与胃癌的转移相关，分析发现TFF3和TR3有着密切的相关性。TFF3的结合蛋白尚未发现，其转移侵袭的内在机制不明。我们前期通过GST pull-down发现与TFF3相互作用的蛋白CACNG8。CACNG8是电压依赖性钙离子通道的亚基，可激活该离子通道，而引起细胞内外钙浓度变化。研究证实钙离子可以引起TR3的定位表达变化。TFF3是否通过其作用蛋白CACNG8而引起TR3变化而进一步促进胃癌的转移侵袭呢？因此我们将通过Co-IP、哺乳动物双杂交、siRNA、免疫荧光细胞化学等技术，验证CACNG8为TFF3的结合蛋白，及TFF3在胃癌转移侵袭中的内在机制。

三叶因子（TFFs）是一群主要由胃肠道黏液细胞分泌的可溶性小分子多肽。其中TFF3在消化道黏膜保护和上皮重建、调节细胞凋亡以及肿瘤的发生和侵袭等方面发挥重要作用，但具体分子机制仍未阐明。本课题首先应用酵母双杂交及GST-pull down技术筛选了TFF3的候选结合蛋白，进一步研究发现TFF3虽然与候选蛋白CACNG并不直接结合，但TFF3通过促进Ca2+内流并诱导胃癌细胞凋亡。随后我们探讨了TFF3对胃癌细胞生物学行为的影响，明确了TFF3对胃癌细胞增殖、迁移侵袭的促进作用，并通过干预实验证实多种信号通路如PI3K、MAPK等均参与其中。此外，我们还明确了缺氧条件下TFF3、VEGF、HIF-1α的表达协同升高，并反过来加剧胃癌的演进与侵袭转移进程，提示TFF3可能在胃癌细胞缺氧信号转导过程中发挥了重要作用。通过本项目的深入研究，我们将丰富对TFF3功能的探讨，有助于明确TFF3结合蛋白及可能的作用模式，有助于进一步阐明TFF3在胃癌迁移侵袭及缺氧诱导肿瘤发生发展中的功能机制，为以TFF3为治疗靶点提供理论依据，为消化道病变及肿瘤研究开拓新的途径或治疗手段。