DLK1在MicroRNA-126-5p调控下通过整合素调节皮肤创面愈合的机制研究

Skin wound is a pivotal clinical problem, explorering the underlying mechanisms is the fundamental of develop effective therapeutic strategies. Non-coding RNA and microenvironment cues play crucial roles in wound healing processes and has rising growing interests in recent years, but the roles and mechanisms of them are far from being fully elucidated. From our preliminary experiments, we found that miR-126-5p is down regulated during wound repair processes, and its speculated target, DLK1, an extracellular matrix protein, is overexpressed during skin wound healing, and exogenous applied DLK1 protein can promote wound healing, further analysis indicated that DLK1 can promote keratinocytes migration and inhibit its adhering to collagen I and IV. We also discovered that DLK1 can activated the FAK and Src activation, which are downstream kinases of integrin. So, we speculate that DLK1 might crosstalk with integrin α1, α2, α9 or α10. To confirm our hypothesis, we plan to interfere miR-126-5p and DLK1 in vivo in mice skin wound model, and adopt immunohistochemisty, luciferase reporter assay, co-IP, immunocytofluorescence to investigate their roles and mechanism in animal, cell and molecular levels.

皮肤创面是重要的临床问题，非编码RNA及微环境在创面愈合中发挥重要作用，但许多非编码RNA及微环境因素对创面愈合的作用及机制尚不清楚。我们的前期研究显示MiR-126-5p在皮肤修复过程中表达下调，且细胞外基质蛋白DLK1的表达受其调控，并且我们发现DLK1在创面愈合中高表达，其作用机制为加速角质形成细胞迁移，从而促进上皮舌形成。我们还发现DLK1可以抑制角质形成细胞与胶原蛋白间的粘附，并且可以激活整合素下游信号激酶FAK、Src。因此，我们推测DLK1可能和介导胶原蛋白粘附的整合素α1、α2、α9或α10存在相互作用，并因此调控角质形成细胞迁移。为了验证该假说，我们拟通过小鼠创面模型体内干预MiR-126-5p及DLK1表达，通过免疫组化、荧光素酶报告基因、免疫共沉淀、细胞荧光等技术从动物、细胞及分子水平探索MiR-126-5p、DLK1、整合素信号轴在皮肤创面愈合中的作用及机制。

皮肤创面愈合是一个重要的临床问题，细胞外基质蛋白通过调控微环境影响创面愈合，但许多细胞外基质蛋白在皮肤创面愈合中的作用还没有研究。DLK1是一种细胞外基质蛋白，我们发现其可以促进小鼠皮肤创面愈合，并且发现MicroRNA-126-5p可以调控其表达，并抑制小鼠皮肤创面愈合。在进一步的创面标本免疫组织化学研究及细胞功能试验中发现，DLK1重组蛋白通过促进上皮舌形成、角质形成细胞迁移促进皮肤创面愈合。通过细胞粘附实验及干扰整合素表达后进行细胞划痕实验验证，我们发现DLK1促进创面愈合及角质形成细胞迁移依赖于整合素a2。进一步的细胞免疫荧光实验中发现，DLK1影响角质形成细胞局部粘着斑的成熟，而局部粘着斑是影响细胞运动的重要成分，我们发现DLK1可以影响局部粘着斑重要蛋白Vinculin的募集及下游激酶FAK、Src的磷酸化。在该研究中还发现DLK1对皮肤创面愈合后的胶原蛋白沉积有抑制作用。本研究发现了细胞外基质蛋白DLK1可以促进皮肤创面愈合，其调控机制为MicroRNA-126-5p——DLK1——整合素a2——vinculin——粘着斑激酶FAK、Src。本研究加深了对皮肤创面愈合病理过程的了解，加深了细胞外基质蛋白调控创面愈合机制的研究，并提供了一个可用于开发促进皮肤创面愈合的药物研究靶点。