血小板在高血压致炎症和心脏纤维化中的作用及机制的研究

高血压可引起心脏纤维化和心力衰竭。已知高血压，尤其是升高的血管紧张素II导致炎症反应与纤维化有关，但炎症反应引起心脏纤维化的机制目前不清楚。我们前期研究发现，抑制血小板的聚集明显抑制血管紧张素II灌注引起的炎症细胞的浸润及心脏纤维化。P-选择素参与血小板的活化并介导单核细胞的局部浸润。进一步的研究发现，P-选择素基因敲除显著抑制血管紧张素II导致的心脏纤维化。据此我们提出假设：活化的血小板通过P-选择素引起炎症反应及心脏纤维化。本研究将以P-选择素基因敲除鼠为基础，采用血管紧张素II微量泵灌注模型，结合P-选择素基因敲除鼠与野生小鼠之间血小板交叉移植、病理分析、免疫组化、流式分析等技术，确定血小板通过P-选择素参与血管紧张素II导致的炎症反应及心脏纤维化的机制。本研究将阐述高血压致心脏纤维化的病理过程，还可能指导高血压致心脏纤维化的临床治疗。

本课题主要研究了血小板在血管紧张素II灌注引起的高血压致心脏纤维化中的作用。以P-选择素基因敲除鼠为基础，通过血管紧张素II(1500ng/kg/min)微量泵灌注引起高血压致心脏纤维化，采用P-选择素基因敲除鼠与野生鼠血小板交叉移植的方法，通过病理分析、免疫组化等技术进行了深入研究。研究发现血小板源性的P-选择素在血管紧张素II灌注引起的血管炎症和心脏纤维化中起了重要的作用。P-选择素基因敲除鼠与正常对照相比，其心脏纤维化程度和血管炎症明显减轻。1）Masson染色显示经血管紧张素II灌注之后，P-选择素基因敲除组与野生组相比心脏纤维化程度明显减轻。2）免疫组化染色显示P-选择素组心脏组织中α-sma、TGF-β1表达降低。3)western blot检测P-选择素组心脏组织中炎症因子ICAM-1和TGF-β表达均明显降低，同时检测到smad3和smad7蛋白表达下降。4）HE染色显示血管紧张素II灌注可以明显增加野生鼠降主动脉的内膜厚度，P-选择素基因敲除鼠无明显变化。4）免疫组化染色显示与对照相比血管紧张素II灌注后P-选择素基因敲除鼠的降主动脉平滑肌细胞中TGF-β1和Smad2/3的表达下降。通过血小板交叉移植技术，发现血小板源性的P-选择素在这个过程中发挥重要的作用。1）与阳性对照组相比经血管紧张素II灌注的P-选择素基因敲除鼠在移植了野生型血小板后其心脏纤维化程度及血管炎症因子的侵润没有明显的变化；而与对照相比，野生型小鼠在给予白消安抑制自身血小板功能后移植了基因敲除鼠血小板后，其心脏纤维化程度和血管炎症均有所减轻。因此，抑制血小板源性的P-选择素可以明显减轻血管紧张素II灌注引起的高血压致心脏纤维化及血管炎症反应。