朝鲜族大酱中的大豆异黄酮对乳腺癌细胞的凋亡作用及其分子机理研究

The Chinese Korean soybean paste has been developed with the native ethnic features ,rich nutrition and delicious taste,has become the most common food in Chinese Korean ethnic people’s diet. Although the great achievements have been achieved on utilization and research of traditional soybean past in China, the study on mechanism of anticancer activity with soybean isoflavone separated from the Chinese Korean soybean paste is still in blank.In our prophase research,we have found the unique soybean variety suitable for making the soybean paste,the technological conditions have been optimized, the nutritional components were analyzed and part of the physiological activity have been studied.This project will study the effect of apoptosis in human breast cancer cells by the soybean isoflavone separated from Chinese Korean soybean paste in different storage period.We will study the biological effect of apoptosis of breast cancer cells by flow cytometry, RT-PCR, Western and other detection methods, to clear the molecular mechanism of apoptosis.The purpose is to promote the reasonable development and application of Chinese Korean soybean paste in ethnic minority regions. The result of this research can be used as a development direction of the Chinese Korean soybean paste, to more nutrition and health care, also provide a theoretical basis for further Chinese Korean soybean paste basic research and anticancer diet therapy.

朝鲜族大酱营养丰富，味道鲜美，具有独特的民族风味，是朝鲜族居民餐桌上最普通、最常见的食品。我国在传统大酱的研究方面取得了很大成绩，但是朝鲜族大酱的大豆异黄酮对乳腺癌的凋亡作用研究还是空白。在前期研究中我们已获得适合制作朝鲜族大酱的专用大豆、优化了朝鲜族大酱的制作工艺、分析了营养成分并进行了部分生理活性研究。本项目是为进一步探讨不同储存时期下朝鲜族大酱中的大豆异黄酮对乳腺癌细胞凋亡作用的影响。本课题拟运用流式细胞术、RT-PCR检测、Western等方法，明确大豆异黄酮对乳腺癌细胞凋亡作用的分子机理。目的是推动边疆少数民族地区朝鲜族大酱的合理开发和应用。研究结果可为朝鲜族大酱进一步向营养、保健等方向发展，为今后朝鲜族大酱的基础研究和癌症饮食疗法的推广提供理论基础。

大酱中的主要成分为大豆异黄酮类物质，其具有抗氧化、抗肿瘤等多种功效，还有雌激素作用。乳腺癌为当今女性发病率和致死率较高的一种疾病，结合大豆异黄酮类物质的功效，我们对朝鲜族大酱大豆异黄酮提取物对乳腺癌细胞凋亡作用进行了初步研究。.为研究朝鲜族大酱发酵过程中主要活性成分的变化，以及其对乳腺癌细胞凋亡作用的影响，本试验选用实验室自制朝鲜族大酱，在不同发酵时期(0、1、3、6、9、12个月)进行取样，通过高效液相色谱法(HPLC)对其成分进行测定，选取最佳贮藏时期的朝鲜族大酱进行提取。通过CCK-8法测定朝鲜族大酱大豆异黄酮提取物(IEOKSP)对正常乳腺细胞、MCF-7乳腺癌细胞、MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖的影响；通过划痕愈合实验，观察愈合程度；通过流式细胞术检测不同浓度的IEOKSP处理MDA-MB-231和MCF-7两种乳腺癌细胞后的细胞凋亡情况，以及周期变化。通过RT-PCR检测了caspase-3 mRNA的表达情况，Western Blot法检测了凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Survivin、Caspase-3、cleaved-caspase-3的表达情况。最后通过Sea House细胞能量仪检测了通过IEOKSP处理后的MDA-MB-231和MCF-7两种乳腺癌细胞的能量代谢情况。.结果显示，朝鲜族大酱随着发酵的进行，贮藏时间的延长，其提取物中异黄酮组分有所变化，其中大豆苷元和染料木素随着贮藏时间的延长，含量逐渐升高，而大豆苷含量逐渐减少，三者总含量在贮藏三个月时达到最高；IEOKSP可抑制MDA-MB-231和MCF-7两种乳腺癌细胞的细胞活力，并呈现浓度-时间依赖性，能够有效地抑制细胞迁移，阻断细胞G1期进行阻滞，诱导细胞凋亡；IEOKSP能够提高MDA-MB-231和MCF-7两种乳腺癌细胞中caspase-3 mRNA的表达，同时能够上调Bax，caspase-3，cleaved-caspase-3蛋白的表达，下调Bcl-2，survivin蛋白的表达从而引起细胞凋亡；IEOKSP能够通过线粒体途径降低乳腺癌细胞的耗氧率。.目的是推动边疆少数民族地区朝鲜族大酱的合理开发和应用。研究结果可为朝鲜族大酱进一步向营养、保健等方向发展，为今后朝鲜族大酱的基础研究和癌症饮食疗法的推广提供理论基础。