克罗恩病基于分化动力学平衡偏移的CREB相关长链非编码RNA变异机制研究

与肿瘤、消化性溃疡等其他消化系统疾病不同，克罗恩病的整个病程具有独特的反复发作和迁延难愈的治疗难点。目前对克罗恩病的机制探索集中于免疫动态平衡破坏这单一方面，而联合分析免疫动态平衡破坏-修复交替过程将有助于对克罗恩病反复发作的认识。本项目基于Foxp3介导的Treg细胞分化动力学平衡偏移这一全新视点，立足于前期工作中发现的CREB相关长链非编码RNA变异可能参与Foxp3转录增强机制，通过初步分析CREB上游LncRNA变异→CREB表达改变→Foxp3转录改变→Treg细胞分化动力学平衡偏移→免疫平衡破坏这一作用轴，探讨分化动力学平衡偏移能否成为克罗恩病缓解和复发指示标志以及逆转CREB上游LncRNA变异作为克罗恩病治疗新策略的可能性。该项目基于崭新的分化动力学平衡偏移视角，从CREB相关长链非编码RNA变异切入克罗恩病反复发作的机制,为克罗恩病的诊治提供新的启迪。

本项目基于Foxp3 介导的Treg 细胞分化动力学平衡偏移这一全新视点，探讨分化动力学平衡偏移能否成为克罗恩病缓解和复发指示标志以及逆转CREB 上游LncRNA 变异作为克罗恩病治疗新策略的可能性。通过研究我们发现，Treg与Teff共培养时，CD患者中Teff在24小时内的平均增殖率为与对照组相比，两者在统计学上无显著差异。CD4+CD45RA-Foxp3hi aTreg的比例在活动期CD患者减少（P < 0.01）。定量RT-PCR结果显示，DQ786243的表达在活动期CD患者中显著升高(P = 0.004)。CRP与DQ786243存在良好的相关性（r = 0.489, P = 0.034）。DQ786243与Foxp3的表达存在一定的线性相关性（r = 0.435, P = 0.021）。CREB和Foxp3之间无明显的相关性。在DQ786243转染48小时之后，Foxp3的mRNA表达水平在Jurkat细胞中显著升高(P = 0.046)，p-CREB/t-CREB在转染后24小时及48小时出现增加（P = 0.0043）。缓解期患者TSDR去甲基化的比例与活动期患者及健康对照者之间比较未发现显著差异。TSDR去甲基化的比例肛周病变患者中升高（T-Test，P = 0.0036）。在DQ786243转染后TSDR去甲基化水平出现了升高，且具有统计学意义（ANOVA, P = 0.0010）。通过上述结果，我们认为正常对照与CD患者外周血Treg的抑制功能无显著差异。采用CD4+CD45RA-Foxp3hi作为流式标志发现CD患者aTreg数量低于正常对照。DQ786243与CD患者的疾病活动性有关并可以影响CREB及Foxp3的表达。CREB本身并不介导DQ786243上调Foxp3的表达，这一过程可能通过CREB的磷酸化来完成。目前尚无足够的证据显示CD患者外周血Treg数量与正常人之间存在差异。Treg的数量在具有肛周病变的CD患者中出现升高。LncRNA DQ786243在Jurkat体外实验中可以影响Foxp3 TSDR去甲基化的水平，这可能是DQ786243调节体内Foxp3表达的另一机制。