朊蛋白参与鸡马立克肿瘤细胞增殖扩散的分子机制

本项目依据PrPC和MDV的现有研究结果，借助申请者多年在朊蛋白方面的研究经验，以MD病鸡作为肿瘤模型，应用免疫组化、实时荧光定量PCR、细胞流式、干扰RNA等技术及免疫印迹、细胞黏附、细胞侵袭等实验，研究MD发病过程中PrPC在鸡体内各组织器官的分布、表达特征，比较分析MD病鸡与健康鸡体内组织中PrPC的差异表达，检测 MDV感染体外培养细胞PrPC的分布和表达量。在此基础上，通过体外研究PrPC表达对MD肿瘤细胞（MSB-1）增殖、扩散以及相关基因表达的影响，从细胞及分子水平上揭示PrPc参与MSB-1细胞增殖及扩散的机制，探明PrPC在MD肿瘤生成过程中发挥的调节作用，详细阐述与MDV致病、致瘤作用相关基因的生物学功能。该研究将对阐明PrPC的生物学功能有重要意义，对进一步揭示肿瘤性疾病的发病机制研究具有积极的作用。

朊蛋白在真核生物的大部分组织中均有表达，在哺乳动物细胞生存、凋亡、粘附、侵袭及肿瘤形成过程中具有重要作用，鸡朊蛋白表达分布规律与哺乳动物相似，推测鸡朊蛋白生理功能可能与哺乳动物的相关。本研究以马立克病病鸡作为肿瘤模型，研究了马立克发病过程中鸡朊蛋白在鸡体组织器官的分布、表达特征；比较分析了马立克病鸡与健康机体内组织中鸡朊蛋白的差异表达；检测分析了马立克病毒感染鸡成纤维细胞的朊蛋白表达量；并建立了鸡朊蛋白过表达和抑制表达的鸡成纤维细胞DF-1细胞系和MSB1细胞系，检测了鸡蛋白表达量的改变引起的细胞生物学行为的变化及转录组的表达差异，进一步对相关重要的几个表达差异的基因进行验证。结果表明鸡朊蛋白与马立克病毒的感染与增殖相关，在DF-1细胞和MSB1细胞粘附、增殖、侵袭、迁移和凋亡等过程中具有重要作用，为进一步阐明鸡朊蛋白生理功能及其作用机制提供依据。