泄浊化瘀法对TGF-β1调控人肾小管上皮胞I型胶原启动子活性的信号通路研究

利用基因重组、基因瞬时转染及测活技术，用含人α1（I）前胶原基因COL1A1质粒重组体，转染人肾小管上皮细胞，观察转染I型胶原COL1A1启动子的人肾小管上皮细胞受TGF-β1诱导后，细胞跨膜信号转导蛋白TGF-βI和TGF-βII受体、细胞浆内Smad2、3、4和Smad7及细胞核内信号转导蛋白Smads、核转录因子SP-1的表达变化，研究人肾小管上皮细胞COL1A1启动子活性受TGF-β1调控的细胞信号转导途径；同时观察丹参酮IIA对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞COL1A1启动子活性的调控作用，及其对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞COL1A1启动子活性信号转导的干预环节。

背景：肾小管间质纤维化几乎是所有慢性肾脏疾病进行性发展的终末期的共同表现，是终末期肾病的主要病理基础。研究细胞生长因子刺激肾小管上皮细胞分泌I型胶原，是肾脏纤维化/硬化形成机制的重要研究内容。方向：本研究利用基因重组、基因瞬时转染及测活技术，用含人α1（I）前胶原基因COL1A1质粒重组体，转染人肾小管上皮细胞，观察转染I型胶原COL1A1启动子的人肾小管上皮细胞受TGF-β1诱导后，细胞浆内Smad2、3、4和Smad7的表达变化。研究内容：研究人肾小管上皮细胞COL1A1启动子活性受TGF-β1调控的细胞信号转导途径；观察丹参酮IIA、大黄酸和大黄素对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞COL1A1启动子活性的调控作用，研究丹参酮IIA、大黄酸和大黄素对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞COL1A1启动子活性信号转导的干预环节。结果：研究表明，TGF-β1对人肾小管上皮细胞COL1A1启动子活性具有明显的正调控作用，显著提高了启动子的活性，其与细胞浆内信号转导蛋白Smad2、3和Smad7的表达具有高度相关，COL1A1启动子活性与Smad2、3表达上调和Smad7下调具有明显的相关性, TGFβ1作用下COL1A1启动子活性增强，Smad2、3表达上调，Smad7的表达下调；丹参酮IIA和大黄素对转染COL1A1启动子的人肾小管上皮细胞受TGFβ1诱导后，其信号转导Smad2、3和Smad7的表达具有明显的干预作用，丹参酮IIA具有不同程度的下调由于TGFβ1作用下的COL1A1启动子活性的作用，同时其下调Smad2、3的表达，提高Smad7的表达作用，结论：丹参酮IIA和大黄素对TGFβ1作用下COL1A1启动子活性的影响与TGFβ1的信号转导Smad2、3和Smad7过程相关。