本研究拟以HIV-1 pol和gag区等长片段RNA为例,探讨MS2噬菌体RNA中的19mer茎环结构(包装位点)在外源长片段RNA包装入MS2包膜蛋白中并形成耐RNase病毒样颗粒中的作用机制。在采用PCR定点突变将茎环结构上-5位的U变为C,使得其与MS2包膜蛋白的相互作用的亲和力提高的基础上,再改变该茎环结构在外源拟包装RNA中的位置和数量,通过构建单质粒双表达系统,原核和真核表达内含上述外源RNA的病毒样颗粒,从而建立全新的可表达内含长片段RNA(大于3.0kb)的耐RNase的病毒样颗粒的平台,并得到含长的HIV-1pol区的片段(约3.0kb)和gag区(约1.5kb)RNA病毒样颗粒,并尝试用于HIV-1 mRNA疫苗、新型标准品和质控品的研究。本研究将为构建和表达内含特定长片段外源RNA序列的病毒样颗粒提供基础平台,在RNA疫苗和病毒核酸检测上具有重要理论和应用价值。
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数据更新时间:2023-05-31
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