新发现心肌缺血相关基因在心肌的表达和功能

我们前期研究中通过制作大鼠急性心肌缺血模型，缺血1h后用抑制消减杂交筛选到4个未报道的心肌缺血后表达升高基因:Ssb、Basigin、Unc45a、Ctsl,和7个相关的全新EST 克隆。本课题拟用定量PCR和免疫组织化学方法从RNA和蛋白表达两个方面验证上述基因在心肌缺血后的表达部位和表达量，尤其关注他们在缺血后的早期表达情况（5min,10min,20min,30min等）；克隆相关新基因。用RNAi抑制上述基因表达后观察心肌细胞损伤情况，明确这几个基因是否参与缺血后心肌损伤；探讨Bsg和Ctsl这两个基因的表达与MMP介导、基质破坏、细胞凋亡的关系；选择合适的分子在心源性猝死者的心肌中进行验证。本研究意义:（1）明确这些基因在心肌缺血早期的表达情况，为心肌缺血早期诊断或干预寻找分子标靶；（2）明确上述基因的表达产物在心肌缺血损伤中的作用（3）发现新的心肌缺血相关基因，表达其全序列。

我们曾利用抑制消减杂交技术（SSH）获得了cathepsin L（CTSL）,BASIGIN等基因和若干EST可能与急性心肌缺血相关。本研究中我们采用REALTIME PCR 和免疫组织化学染色（IHC）技术证明了CTSL基因可在大鼠急性心肌缺血时候高表达，并在心源性时猝死（sudden cardiac death，SCD）的死者心肌中证实。同时，为了研究CTSL的功能，我们在大鼠活体心肌中导入的SiRNA的办法降低CTSL mRNA的表达，观察到该基因对于急性心肌损伤的保护作用包括血液动力学指标（LVSP, LVEDP, ±DP/DT MAX）以及心肌损伤指标（LDH和MDA）的改善，减小心肌梗死面积。 对于EST克隆，目前为止我们用RACE得到一个完整的克隆到。尚未进行表达和功能研究。其他的克隆，得到了3’端但是由于5’端不完整未能得到完整的克隆。.本研究证实了CTSL基因在心肌心肌缺血可高表达，有可能作为SCD的标记物而应用于法医学SCD的诊断等。另外证实了CTSL基因在急性心肌缺血中的对于心肌缺血的保护作用。