附睾蛋白酶抑制剂(EPPIN)基因转录调控的分子机理

附睾蛋白酶抑制剂(EPPIN)是一种在精子成熟过程中具有重要功能的蛋白酶抑制剂。在雄激素受体（AR）基因敲除小鼠睾丸中EPPIN基因的表达显著下降，该结果提示EPPIN基因的转录可能受到AR的调控；生物信息学分析发现EPPIN基因上游启动子区的确含有AR反应元件，但具体的调控机制还不清楚。本项目拟采用报告基因分析EPPIN基因的核心启动子和关键转录调控元件；凝胶阻滞实验等方法确定在体外AR与EPPIN基因调控元件的结合，采用RNA干扰和染色质免疫沉淀等方法分析细胞内AR对EPPIN基因的转录调控作用；采用DNA亲和层析等技术分离鉴定其它参与EPPIN基因表达调控的蛋白因子，从分子水平探讨EPPIN基因转录调控机制。该项目对于进一步阐明精子成熟的分子机理具有重要的学术意义，也将为男性不育症的治疗和避孕疫苗的开发提供新的途径。

附睾蛋白酶抑制因子(EPPIN)是一种在精子成熟过程中具有重要功能的蛋白酶抑制因子。在雄激素受体（AR）基因敲除小鼠睾丸中 EPPIN 基因的表达显著下降，该结果提示 EPPIN 基因的转录可能受到 AR的调控，但具体的调控机制还不清楚。本项目以小鼠睾丸支持细胞系（TM4、15P-1）和附睾细胞系（PC-1和DC-2）为实验对象，采用荧光素酶报告基因分析方法检测雄激素及其受体对Eppin基因启动子转录活性的影响。结果显示，雄激素受体对Eppin基因启动子转录活性无显著影响，表明在小鼠睾丸支持细胞，Eppin不是雄激素受体直接调控的靶基因。. 为了进一步寻找AR的靶调节基因，本项目采用数字化表达谱测序(Digital gene expression sequencing)等技术，比较成年SCARKO小鼠与WT小鼠睾丸组织、雄激素处理前后的小鼠睾丸支持细胞系TM4基因表达谱的差异，发现受雄激素上调的基因为164个，而受雄激素下调的基因有439个。相关论文发表于2012年发表于 Asian Journal of Andrology。 在数字化表达谱测序数据的基础上，采用荧光定量RT-PCR、荧光素酶报告基因检测、凝胶阻滞和染色质免疫沉淀等方法，确定了Ube2b基因上的雄激素反应元件。 以此前期结果为基础，我们成功获得2012年国家自然科学基金面上项目：雄激素调控泛素结合酶UBE2B表达的分子机理及其生物学意义(编号：31271244)，72万元。. 同时，我们在一例完全性雄激素受体不敏感综合症患者中，发现一个新的雄激素受体突变位点，该突变导致雄激素受体的转录提前终止，相关论文于2012年发表在 Journal of Andrology。