基于人附睾蛋白酶抑制剂优势表位多肽的转基因番茄口服避孕疫苗研究

人附睾蛋白酶抑制因子（Eppin）基因是新发现的免疫避孕靶抗原。本课题组成功筛选并鉴定了Eppin蛋白优势表位，在雄鼠体内产生高滴度特异抗体，影响精子运动力及抗生育，但粘膜免疫应答较弱、抗生育效能（70%）尚不理想。抗生育效能与疫苗诱发的黏膜免疫反应强度有关，转基因植物口服疫苗能有效启动黏膜免疫应答。本研究拟选用自行克隆的番茄E8启动子以启动Eppin优势表位多肽在番茄果实中特异表达，提高靶蛋白表达量；与CTB亚单位融合表达增强黏膜免疫反应。采用农杆菌介导的植物遗传转化方法，获得转基因番茄抗性植株；PCR手段鉴定转基因番茄，Western印迹检测目标抗原蛋白的免疫原性。转基因番茄果实直接口服免疫雄鼠，检测Eppin抗原蛋白的抗生育效能，病理检测、交叉抗原反应等评价其安全性。通过本研究有望提高Eppin抗生育效能，获得高效、安全、能直接口服、具有自主知识产权的Eppin转基因番茄口服避孕疫苗

人附睾蛋白酶抑制因子（Eppin）基因是新发现的免疫避孕靶抗原。本课题组成功筛选并鉴定了Eppin蛋白优势表位，在雄鼠体内产生高滴度特异抗体，影响精子运动力及抗生育，但粘膜免疫应答较弱、抗生育效能（70%）尚不理想。抗生育效能与疫苗诱发的黏膜免疫反应强度有关，转基因植物口服疫苗能有效启动黏膜免疫应答。本研究拟选用自行克隆的番茄E8启动子以启动Eppin优势表位多肽在番茄果实中特异表达，提高靶蛋白表达量；与CTB亚单位融合表达增强黏膜免疫反应。采用农杆菌介导的植物遗传转化方法，获得了转基因番茄抗性植株；PCR手段鉴定转基因番茄，Western印迹检测到目标抗原蛋白的免疫原性。转基因番茄果实直接口服免疫雄鼠，检测到特异性Eppin抗原蛋白的抗生育效能，病理检测、交叉抗原反应等评价其安全性。通过本研有效地提高了Eppin抗生育效能，获得了高效、安全、能直接口服的Eppin转基因番茄口服避孕疫苗。