融合蛋白转导序列的HCV核心蛋白源性多肽靶向抑制病毒颗粒组装的研究

Standard of care (SOC) consisting in the co-administration of pegylatedinterferon-a and ribavirin (Peg-IFN/RBV) provided limited efficacy, was poorly tolerated.Because of the high genetic heterogeneity of HCV and its rapid replication, monotherapy with direct acting antiviral( DAA )agents poses a high risk for selection of resistant variants.New DAA drug is urgent.HCV core protein play an important role in HCV life cycle,such as lipid droplet formation, virus assembly and budding.Core protein is more conserved in differet gentype virus,recognized as a potent drug target.It is more value to develop some drug directed to core protein.we would design peptide inhibitors of HCV assembly,containing with protein transduction domain,HCV core derived domain and location sequence.The peptide inhibitors can enter into HCV infected cells,locating to the membrane associated with virus assembly and hamper virus assembly.we will assess the antiviral activity of peptide inhibitors by HCV culture system in vitro.The aim of this study is to get peptide inhibitors for HCV assembly,and show new idea for new DAA drug development.

HCV感染的标准治疗方案应答率依赖于病毒基因型及宿主因素，耐受性差，使其应用受到一定限制。目前的直接抗病毒（DAA）药物易发生耐药，必需联合干扰素或其他靶点DAA药物以减少耐药，因此寻求新的抗DAA药物依然迫切；HCV核心蛋白在病毒包装、分泌等过程起着重要作用，且在各基因型中相对保守，因此寻求针对核心蛋白的DAA药物有着重要价值。本课题拟设计一种针对病毒颗粒组装的多肽抑制剂，其包括蛋白转导序列、HCV核心蛋白源性序列和亚细胞定位序列；通过结构设计可以使HCV核心蛋白源性序列有效进入细胞，并定位于病毒颗粒组装相关的内质网或脂滴，与胞内核心蛋白相互作用，达到干扰HCV组装的目的；拟以HCV体外培养系统为研究平台，对所设计的多肽抑制剂的活性和特异性进行评价与序列优化，并对其进行免疫原性和生物毒性评价；本课题旨在获得一种针对HCV病毒颗粒组装的多肽抑制剂，并为寻求新的抗HCV药物提供新思路。

丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）是导致慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌的重要原因之一。目前尚无有效的HCV疫苗，但经过规律、全疗程的治疗可以清除感染者体内病毒。我国慢性丙型肝炎治疗仍以Peg干扰素联合利巴韦林的标准方案为主，其疗效受到宿主和病毒基因型的限制，且副作用大，耐受性差。随着直接抗病毒（Direct-acting antiviral ,DAA）药物在欧美上市，丙型肝炎治疗逐渐进入无干扰素时代，其具有效率高、副作用小，疗程短特点，不同靶点DAA药物联合应用，提高疗效，针对不同基因型的普适性，但我国仍没有一种DAA药物批准上市，更无自主研发的药物进入临床实验阶段。HCV核心蛋白在病毒包装、分泌等过程起着重要作用，且在个基因型中相对保守，因此寻找靶向核心蛋白的DAA药物有着重要意义。本课题拟设计一种针对病毒颗粒组装的多肽抑制剂，其包括蛋白转导序列、HCV核心蛋白源性序列和亚细胞定位序列，通过结构设计可以核心蛋白源性序列有效进入细胞，并定位于病毒颗粒组装的内质网或脂滴，与胞内野生的核心蛋白相互作用，达到干扰核心蛋白组装的目的。拟以HCV体外培养系统为研究平台，对所设计多肽的抑制活性和特异性进行评价和序列优化，并对其免疫原性和细胞毒性进行评价。基于以上研究内容，（1）我们采用6种基因型慢性丙型肝炎患者血清提取HCVRNA，扩增核心蛋白到N3区病毒基因序列，在JFH毒株基础上构建6种基因型的杂合株，并进行适应突变，建立体外细胞培养模型我们为了便于初步评价人工多肽的抗病毒活性，我们构建JFH-NS5AGFP、JC1-NS5AGFP，Luc-JFH和luc-JC1（2）利用BioEdit软件对NCBI的蛋白数据库中全长226条HCV蛋白序列进行序列比对，找到了三段相对保守的区域，基于HCV核心蛋白3个重要的保守区段，建立HCV核心蛋白随机多肽库，加入转导序列和定位信号，人工合成，进行细胞毒性评价和活性筛选。（3）利用HCV体外培养系统，我们获得5具有干扰病毒组装的活性序列，并在小鼠体内评价其免疫原性，其中2两条活性相对较高，免疫原性低。总之，我们获得一种针对HCV病毒颗粒组装的抑制剂，并为寻找新的抗HCV药物提过新的思路。