全人源单克隆抗体3B5通过调控I型干扰素信号途径抑制HBV增殖的研究

The fully human monoclonal antibody can inhibit viral multiplication by targeting virus encoded proteins. But the study on fully human monoclonal antibody inhibiting virus proliferation through host innate immune is less. Our previous data showed fully human monoclonal antibody 3B5 can promote the mRNA expression of type I interferon (IFN) and inhibit HBeAg expression of hepatitis B virus (HBV). 3B5 and total proteins of HepG2.215 cells existed binding strip. We hypothesize that 3B5 might inhibit HBV proliferation through regulating type I interferon signaling pathway. The overall goal of our research is to understand the following questions: (1) IFN neutralization test to determine whether the inhibitory effect of 3B5 on the proliferation of HBV by type I IFN signaling pathway; (2) Analysis of co-immunoprecipitation and mass spectrometry to identify the target protein of 3B5; (3) In vivo experiments further verify the effect of 3B5 on type I IFN signaling pathway and HBV proliferation. Finally, we can get the main mechanism of 3B5 in inhibiting the proliferation of HBV. This study will help to clarify the role of fully human monoclonal antibody in host innate immune system and supply new theories for the prevention and treatment of virus.

全人源单克隆抗体能够靶向病毒编码蛋白抑制病毒增殖，但是通过调控宿主固有免疫影响病毒增殖的研究较少。我们前期研究发现全人源单克隆抗体3B5能促进I型干扰素（interferon, IFN）mRNA表达增加，抑制乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）HBeAg的表达，并与 HepG2.215细胞总蛋白有结合条带。因此我们推测3B5可能通过调控I型IFN信号途径抑制HBV增殖。为此本课题拟进行三方面的研究：（1）IFN中和实验确定3B5对HBV增殖的抑制作用是否通过I型IFN信号途径；（2）免疫共沉淀和质谱分析确定3B5的靶点蛋白；（3）体内实验进一步验证3B5对I型IFN信号途径及HBV增殖的影响，综合分析3B5抑制HBV增殖的主要机制。此研究有助于阐明全人源单克隆抗体在宿主固有免疫中的作用，更为病毒的防治提供新的重要理论基础。

全人源单克隆抗体是一种新的靶点治疗药物，其组成结构均由人类抗体基因所编码，现已成功应用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应等疾病治疗当中，但目前在病毒感染方面应用较少。乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）感染是当前严重的全球公共卫生问题之一，由HBV持续感染所引起的病毒性肝炎、肝硬化和肝癌等已成为严重危害人类健康的疾病。我们筛选到4个能分泌全人源单克隆抗体的细胞3B5、3C1、3E8和4F3，4种抗体对正常肝细胞无抑制和结合作用，可以安全使用。4种全人源单克隆抗体作用于HepG2细胞和HepG2.215细胞，只有3B5抗体能够促进I型干扰素（interferon, IFN）mRNA表达。人IgG蛋白纯化柱成功纯化3B5抗体。不同剂量、不同时间点的情况下，3B5纯化抗体作用于HepG2细胞和HepG2.215细胞，促进I型IFN核酸和蛋白表达增加并抑制HBeAg和HBsAg的产生。I型IFN中和抗体加入后，3B5抗体不能促进I型IFN产生增加以及抑制HBV增殖，说明3B5抗体是通过I型IFN信号途径抑制HBV增殖。间接免疫荧光发现3B5抗体能够与HepG2细胞和HepG2.215细胞结合。本研究旨在明确全人源单克隆抗体3B5对I型IFN信号途径和HBV增殖的调控作用及主要机制，进一步阐明了全人源单克隆抗体在宿主固有免疫中的作用，为HBV的防治提供新的重要理论基础，并为HBV的治疗提供新的思路。