PnGL抗抑郁作用的物质基础及其对神经递质-神经细胞（因子）-神经信号转导通道作用机制研究

Total saponins from the leaves of Panax Notoginseng(PnGL) is the extract from the herb of Panax notoginseng (Burk.) F.H.Chen, araliaceae. PnGL can reinforce Qi for tranquilization and activate blood for relieving pain. It is the main material for the traditional Chinese drug Qiyeshenan Tablet. Our previous pharmacological study on PnGL has shown the facts: PnGL has an evident antidepressant effect depending on its close relationship with serotonin system, noradrenergic system and dopamine system. Basing on the previous study and the traditional chinese medicinal theories, such as the complexity of drug components and multiple targets of drug actions, further research needs to be carried out. The correlation of chemical compounds with antidepressant effect of PnGL should be observed with the method of bioassay-guided fractionation and isolation. The bioactive fractions or constituents in PnGL should be known. The antidepressant mechanism, the possible coefficient efficacy, the structure-activity relationship and the dose-effect manner between bioactive constituents should be researched. According to the present information of antidepressant mechanism and targets of drug actions, the effect of PnGL on neurotransmitter-nerve cell (neurotrophic factor)-neuronic signal transduction pathway should be investigated with the methods of radioimmunology, immunohistochemistry, chronic stress depression rat model, relevant spectroscopic analysis and Physical Biology. All efforts will provide some theoretical and experimental evidences for the development of a new antidepressant drug from the traditional Chinese medicine in the future.

三七叶总皂苷PnGL为五加科植物三七茎叶的提取物，具有益气安神、活血止痛的功效，是传统中成药七叶神安片的主要原料。本项目前期的药理研究表明：PnGL具有明显的抗抑郁作用，其抗抑郁机制可能与五羟色胺能系统、去甲肾上腺素能系统以及多巴胺能系统等三种神经递质系统有关。我们将在此基础上，以中医药多成分、多靶点和多途径协同作用整体观的理念为指导，以抗抑郁活性评价为导向，系统研究PnGL的物质基础，确定抗抑郁活性组分或成分，研究主要活性成分的抗抑郁作用机制及它们之间可能的协同作用，以及构效和量效关系。根据抑郁作用机制及相关药理靶点的结构生物学信息，应用放射免疫学、免疫组织化学、大鼠慢性应激抑郁模型，以及各种光谱学技术和先进的生物物理研究方法，阐明PnGL对神经递质、神经细胞（因子）、神经信号转导通道的影响及相关分子机制。为开发新型抗抑郁中药新药提供理论和实验依据。

三七叶总皂苷（PnGL）为五加科植物三七茎叶的提取物。前期研究表明PnGL 具有明显的抗抑郁作用，其机制可能与神经递质系统有关。课题组着重两方面的研究：一是PnGL抗抑郁作用物质基础；二是作用机制。本项目结合活性评价及化学成分分析从总提取物、有效部位（组分）、有效单体三个层面分析PnGL的抗抑郁有效成分。结果表明，以人参皂苷Rb1、Rc、Fc、Rb2、Rb3、Rd等为代表的20(S)-原人参二醇型皂苷是其起效的物质基础。然而目前的药代动力学研究发现天然存在的人参皂苷口服后并没有直接的药理活性，真正进入机体起作用的是其代谢产物，其中一些低糖链次级皂苷（稀有人参皂苷）尤其重要。受此启发，我们猜测PnGL抗抑郁作用应该与稀有人参皂苷密切相关。为此我们选择代表性成分Rb1、Rb3喂服小鼠，3h后收集血液及脑组织对其代谢产物进行分析，结果在血液中均发现稀有人参皂苷C-K，Rh2及PPD，在脑组织中检测出PPD。同时采用体外生物酶解的方法将PnGL适当降解获得较多的稀有人参皂苷，采用CUMS、LHT、TST、FST、OFT、利血平拮抗等6种抑郁动物模型以及甩头实验、奔跑实验、打斗实验综合评价酶解产物EP-3的抗抑郁活性，发现EP-3具有显著的抗抑郁作用。进一步的我们对Rb3及其次级皂苷Rg3、Rh2、C-K、PPD等稀有人参皂苷进行抗抑郁活性对比，结果表明相同的剂量及给药时间，C-K（50、100 mg/kg）具有与Rb3相当的抗抑郁作用，而Rg3在较短的给药时间及较低的剂量下取得与Rb3相同的抗抑郁效果，展现出更好的抗抑郁作用。从多个角度证实了稀有人参皂苷在抗抑郁方面的重要性。物质基础研究不再仅停留在“表面”活性人参皂苷的分析，开始考虑代谢所形成的稀有人参皂苷上，实现了由浅入深、由表到里的描述。.此外，作用机制研究发现PnGL能够调节脑内单胺（5-HT、NA、DA）水平；逆转FST诱导的血清ACTH、corticosterone升高，具有HPA轴调节功能；长期的给药治疗可以逆转慢性刺激导致的神经营养因子表达降低的情况，调控cAMP-PKA-BDNF及ERK- CREB-BDNF（TrkB）信号通道途径是其可能的分子作用机制。与主流抗抑郁化药不同，PnGL应该是多重起效的复杂的作用机制。.本项目属于基础研究，为新药开发提供理论和实验依据，具有重要的理论研究意义和应用价值。