DADS上调miR-200b和miR-22表达抑制胃癌生长的分子机制研究

前期我们已经证实二烯丙基二硫（DADS）可通过多条信号转导通路抑制人胃癌细胞生长，申请者通过miRNA芯片的筛选和验证，发现DADS显著上调胃癌细胞miR-200b和miR-22的表达，经初步证实miR-200b和miR-22均可抑制胃癌细胞生长，且二者有协同效应；miR-200b可靶向抑制DNMT1、DNMT3B，而miR-200b和miR-22共同靶向抑制SP1。已有研究表明，SP1可调控DNMT1，抑瘤基因P16、E-cadherin在胃癌中因启动子高甲基化使其表达失活，本项目拟在前期研究基础上，采用MassArray、EMSA、ChIP和qRT-PCR等技术鉴定DADS-miR-200b/miR-22-DNA甲基化转移酶-P16/E-cadherin调控通路的科学假说，为寻找DADS的作用靶分子及其抗肿瘤治疗提供实验依据。

胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一。前期已经证实DADS可通过多条信号转导通路抑制人胃癌细胞生长，并可诱导胃癌细胞凋亡，本研究通过miRNA芯片的筛选和验证，发现DADS显著上调胃癌细胞miR-200b和miR-22的表达，经初步证实miR-200b和miR-22均可抑制胃癌细胞生长，且二者有协同效应；荧光素报告载体系统证实Wnt-1是miR-22和miR-200b直接调控的共同靶基因；Western blot和qRT-PCR结果显示，miR-22和miR-200b能下调Wnt-1的蛋白和mRNA水平；MTT检测显示，高表达miR-22和miR-200b或si-Wnt-1可抑制人胃癌细胞增殖，而miR-22或miR-200b抑制剂能部分逆转si-Wnt-1对人胃癌细胞的增殖抑制作用；AnnexinV-FITC和PI染色法检测显示，高表达miR-22和miR-200b或si-Wnt-1可诱导人胃癌细胞发生凋亡，而miR-22或miR-200b抑制剂能部分逆转si-Wnt-1对人胃癌细胞的促凋亡作用。进一步实验证实DADS通过上调miR-22和miR-200b抑制Wnt-1信号通路达到抑制胃癌细胞生长增殖，诱导胃癌细胞凋亡。为进一步探讨DADS上调的miR-200b参与胃癌的发生发展的分子机制，通过原位杂交和qRT-PCR证实miR-200b/c在126例胃癌组织中表达下调，miR-200b/c表达与胃癌的临床分期，淋巴结转移显著相关，且miR-200b/c高表达的胃癌患者有较好的预后。荧光素报告载体系统证实miR-200b/c可直接靶向抑制DNMT3A、DNMT3B以及SP1，间接通过SP1下调DNMT1进而恢复因启动子高甲基化使其表达失活的抑瘤基因P16、RASS1A1、E-cadherin的表达。本项目初步阐明DADS-miR-200b-DNA甲基化转移酶-P16/E-cadherin调控通路的科学假说，为寻找DADS的作用靶分子及其抗肿瘤治疗提供实验依据。相关结果在Clin Cancer Res、Molecular Cancer Therapeutics、Cancer Letters等期刊上以第一或通讯作者发表SCI论著14篇，在中华病理学、中国肿瘤临床等杂志上发表第一或通讯作者中文论著5篇；培养了1名博士后和9名硕士研究生；获得衡阳市科技进步一等奖。