RNAi抑制CPNE1表达对骨肉瘤细胞的影响及相关机制研究

Osteosarcoma is a common clinical osteogenic malignant tumor mostly occured in children and teenagers. It is characterized by high risk of malignancy, recurrence, metastasis and poor prognosis. The mechanism of osteosarcoma is still unknown as yet. In recent years, the mechanism of molecular level has a new understanding, but the effect of CPNE1 in osteosarcoma research has not been reported. In our previous works, we have found that the knockdown of CPNE1 will significantly inhibit the proliferation of Saos-2cells and expression of EGFR.This study firstly investigated the expression of CPNE1 and EGFR protein that will unravel their clinical significance in osteosarcoma, then observe the influence of inhibition of CPNE1 expression with RNA interference technique by lentivirus on biological function of human osteosarcoma cells in cell experiments in vitro and animal experiments in vivo and investigate the potential mechanism. These studies will provide the experimental foundation for further research and treatment of osteosarcoma.

骨肉瘤是临床常见的成骨性恶性肿瘤，多见于儿童和青少年，其恶性程度高，易复发和转移，预后差，骨肉瘤发病机制至今尚未明了。近年来，对骨肉瘤的发生机制在分子水平上有了许多新认识，但尚未见到有关CPNE1在骨肉瘤研究方面的报道 。在前期试验中本课题组发现抑制CPNE1基因表达可显著抑制骨肉瘤Saos-2细胞的增殖和EGFR表达。本研究首先探讨骨肉瘤组织中CPNE1和EGFR 的表达及临床意义，然后通过细胞体外及动物体内试验，利用慢病毒介导的RNA干扰技术抑制CPNE1基因的表达，研究CPNE1在骨肉瘤细胞中的生物学功能并探讨潜在的机制,该研究将为骨肉瘤以后的研究和治疗提供实验基础。

骨肉瘤是最常见的主要发生在儿童和青少年的骨恶性肿瘤。CPNE1蛋白是一个高度保守的钙依赖性磷脂结合蛋白，作用于调节信号转导与膜转运。. 在本课题研究中，我们研究了CPNE1在骨肉瘤组织和细胞中的表达，并研究了小干扰RNA（siRNA）锚定CPNE1后，对骨肉瘤细胞的增殖、转移和化疗敏感性的影响。. 结果表明:1.CPNE1在骨肉瘤组织和细胞系中有高表达。2.功能实验证实，CPNE1基因敲除后可以显着抑制骨肉瘤HOS、Saos-2细胞的增殖、集落形成、侵袭转移。3.Western blot分析表明，CPNE1沉默后可下调与肿瘤发生、发展相关的许多蛋白的表达，包括Ras, MEK-1/2, WNT1, β -catenin, cyclin A1, IRAK2 和 cIAP2. 4.CPNE1下调增强了骨肉瘤Saos-2细胞对顺铂和阿霉素的敏感性。. 本研究观察了CPNE1在骨肉瘤组织中的表达并揭示表达的临床病理意义。观察CPNE1对骨肉瘤细胞生物学行为的影响并阐明可能的作用机制。为寻找骨肉瘤新肿瘤标志物和治疗靶点提供一些实验依据和理论基础。为临床应用慢病毒介导的CPNE1沉默治疗骨肉瘤提供了进一步的认识，并且为治疗骨肉瘤患者提供了用药参考。