致死株17XL疟原虫TLR5激动剂的分离和鉴定及其功能的初步研究

CD4+CD25+ Treg细胞的活化是致死株疟原虫引起脑型疟导致小鼠致死的关键因素之一，而CD4+CD25+ Treg细胞被TLR5激动剂活化后能抑制宿主抗肿瘤免疫反应。我们前期研究发现致死株疟原虫17XL含有TLR5激动剂，但具体成分并不清楚。因此，本项目拟采用反向层析、pull-down和质谱分析技术筛选和鉴定17XL疟原虫的TLR5激动剂，观察17XL的TLR5激动剂对活化CD4+CD25+ Treg和促进非致死株17XNL疟原虫增殖的影响；以及感染TLR5激动剂敲除17XL对CD4+CD25+ Treg活化以及疟原虫增殖和小鼠死亡率的影响，探讨17XL TLR5激动剂能否通过活化CD4+CD25+ Treg细胞，抑制小鼠抗疟原虫免疫，最终导致小鼠死亡。这对于理解疟原虫免疫抑制和揭示脑型疟发生机制具有重要的意义，并可为针对疟原虫TLR5激动剂的脑型疟治疗药物的研制提供重要理论依据。

1. 完成了机体识别疟原虫子孢子TLRs受体的鉴定及其在疟原虫发育中的作用和机制的初探：首先构建了一个筛选小鼠TLRs激动剂的双荧光素酶检测平台，然后观察了子孢子裂解产物活化TLRs情况。研究结果发现，机体主要通过TLR2，并可能部分通过TLR4，参与识别子孢子裂解产物；而且TLR2同源二聚体TLR2/2，以及异源二聚体TLR2/1和TLR2/6均能识别子孢子裂解产物。进一步研究发现，子孢子裂解产物是以TLR2和TLR4依赖的方式刺激腹腔巨噬细胞产生炎症因子，而TLR2-/-能显著促进疟原虫红外期和红内期的发育，并可能与其能抑制肝脏炎症因子的释放密切相关。.2. 完成了C5a/C5aR信号在调节红内期灭活全虫疫苗诱导小鼠CD4+T细胞反应中的作用和机制：红内期灭活全虫疫苗免疫能活化补体并产生C5a，其不能有效诱导C5aR-/-小鼠产生保护性免疫。进一步研究发现，C5aR缺失后主要影响了免疫小鼠的CD4+T细胞反应及记忆性CD4+T细胞的形成，但并不影响抗体的产生；而C5aR-/-免疫小鼠CD4+T细胞反应的低下则主要与脾脏DC的成熟及其活化CD4+T细胞能力受限密切相关，与Treg没有关系。