基于代谢网络的心可舒防治冠心病物质基础和作用机制研究

心可舒为临床治疗气滞血瘀型冠心病心绞痛的中成药，疗效确切，副作用小，可长期使用，但其效应物质基础和作用机制并不清楚。本课题针对中药复杂体系效应物质基础和作用机制研究一直缺乏有效方法的状况，拟以心可舒为研究对象，在家兔动脉粥样硬化缺血性病变模型上，综合应用NMR、HPLC-MS/MS、生物信息学等现代分析技术和方法，通过对模型组疾病发展进程和药物干预后血液、尿液、肝组织代谢轮廓图进行分析，探讨其作用于冠心病相关靶蛋白的代谢组学特征和小分子标志化合物。结合体内代谢、分子模拟、整体动物和分子水平药效评价，从多成分层次、多作用环节立体阐释心可舒作用于冠心病心绞痛的主要效应物质群和作用机制，为该复方临床合理应用、质量提高提供科学依据，建立基于代谢网络变化、符合中医药理论、适合中药复杂体系，阐释传统方剂发挥疗效真谛研究方法，推动我国具有自主知识产权创新药研制。

高脂饮食诱导家兔动脉粥样硬化（AS）病变，经静脉注射加压素（VP）诱导家兔实验性心肌缺血模型，心可舒(XKS)可有效减轻家兔的心肌缺血程度和延缓血管AS病变进展，但产生这种血管保护作用却并非在于降低血脂。首次应用基于NMR和LC-MS/MS技术的代谢组学研究了XKS干预对动脉粥样硬化家兔血清、尿液和肝组织代谢紊乱的调控作用。结果表明，XKS对高脂饮食诱发CAD家兔血清、尿液和肝组织代谢异常具有调节作用，其作用涉及到脂质代谢、能量代谢和氨基酸代谢等三大物质代谢的主要通路，提示XKS防治冠心病机制可能是调节体内脂质的代谢和分布、参与氧化应激反应、抑制炎症发生、改善血管内皮功能等。.应用免疫组化和蛋白免疫印迹法研究了XKS对CAD家兔冠脉组织及肝组织中与冠心病相关蛋白的影响。结果表明，XKS可显著改变AS病变冠脉内皮细胞中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和血管细胞粘附分子-1 (VCAM-1)的表达，下调CAD家兔肝组织中过氧化酶体增殖激活受体γ（PPAR-γ）、细胞外信号调节激酶（ERK1/2）及其磷酸化形式 (p-ERK1/2), 细胞核因子κB p65（NF-κB p65）蛋白表达水平和上调蛋白激酶B（Akt）及其磷酸化形式（p-Akt）、肿瘤坏死因子受体I（TNF receptor I）蛋白表达水平，表明XKS能改善冠脉内皮功能，参与氧化应激，促进脂肪酸分解利用、抑制泡沫细胞的生成和改善炎症发生，达到延缓动脉粥样硬化进程的机制。. 应用LC-MS/MS技术在线鉴定了XKS制剂中51个化学成分结构，建立了同时测定其中15个成分含量的LC-MS方法；大鼠口服后在血清中检测到29个原型和29个代谢产物；选择6个与冠心病相关蛋白靶点，包括PPAR-γ；血管紧张素I转化酶（ACE）；羟甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMGR）；环氧合酶2（COX-2）；凝血酶（Thrombin）及二肽基肽酶（DPP IV），联合应用两种分子对接方法对同XKS中化学成分的相互作用进行筛选，部分经酶学活性验证。提示葛根苷A、葛根苷B、丹酚酸A、丹酚酸C、原儿茶醛、染料木素等16个成分可能为XKS的药效成分。本课题初步探讨了XKS干预对家兔动脉粥样硬化模型的作用机制和药效物质群，体现了中药多成分、多靶点、多途径的作用特点，为中药效应物质基础和作用机制研究提供了符合中药整体思想的研究思路和方法。