玻璃化法与海藻酸微囊法对珊瑚胚胎冷冻保存效果的对比研究

Besides the global climate change, more serious pollution of coastal water, the surge in the number of Ancathaster planci, which is the predator of coral, disease, excavating illegally all cause the mass mortality of corals. In recent years, corals tend to become extinct in the areas like Dadonghai in Sanya. It is necessary to preserve the coral sperms. The development of cryobiology provides a new way to preserve corals. The success of the cryopreservation of coral sperms was reported in other countries. According to our research, coral egg membrane is easy to be broken. The egg membrane without fertilization will be broken in an hour, which is the current bottleneck of coral egg cryopreservation.This project is about the cryopreservation of coral embryo, to Compare the efficacy of vitrificationearly or alginate microcapsules for the cryopreservation of coral embryo .The area of coral in Hainan covers over 98% of the total area of coral in China. We can gather amount of coral sperms and eggs in Taiyangwan and Luhuitou in Sanya、Wanning and Yunlongwan in Wenchang, which have unique natural.

珊瑚大量死亡除全球气候（CO2）变化因素外，还有日益严重的近海水质污染，珊瑚天敌生物——长棘海星（Ancathaster planci）的爆发，病害，人为非法挖取等诸多因素。近年部分海域如“三亚市大东海”的珊瑚群已经趋于灭绝，珊瑚种质的保存已经迫在眉睫。低温生物学的发展为珊瑚种质的保存提供了新的手段，珊瑚精子的冷冻保存国外已经有成功的报道。根据本申请人的研究，珊瑚卵膜很容易破碎（没受精的卵膜1个小时后会自己破碎），这也是多年来一直没有攻克珊瑚卵冷冻保存的瓶颈。所以本项目采用珊瑚的胚胎开展冷冻保存技术的研究，主要比较玻璃化冷冻法与海藻酸微囊法对珊瑚胚胎冷冻保存的效果，从而确定最有效的珊瑚胚胎冷冻方法。海南省珊瑚面积占全国珊瑚总面积的98%以上，每年春季珊瑚产卵期在三亚市（太阳湾、鹿回头）、万宁市（大洲岛）和文昌市（云龙湾）沿岸都可采集到大量珊瑚的精和卵，有着得天独厚的自然条件。

全球珊瑚白化死亡现象日益加重，开展珊瑚生态修复的工作势在必行，而在进行珊瑚生态修复的过程中，珊瑚种质保存的研究是一项不可或缺的过程，但由于采集珊瑚卵的困难限制了对珊瑚卵开展一系列基础生理生化的研究，也造成了珊瑚种质保存研究发展进程缓慢。本研究旨在摸索出一条从采集到冷冻珊瑚胚胎行之有效的技术路线，推动该领域的研究进程。主要研究内容包括了珊瑚产卵时间以及产卵珊瑚礁区生态环境的调查，抗冻保护剂对珊瑚胚胎细胞的毒性试验，抗冻保护剂种类和浓度的筛选，冷冻降温程序以及冷冻温度的选择，冷冻时间的选择玻璃化法冷冻胚胎的研究，珊瑚浮浪幼虫冷冻保存的研究和珊瑚水螅体团块的研究等。确定了珊瑚产卵时间和产卵珊瑚礁海域周年性生态环境变化情况，珊瑚胚胎对各抗冻保护剂毒性的耐受性，珊瑚胚胎发育史，不同解冻方案对珊瑚胚胎的实验效果，建立了以鱼鳃血液为抗冻保护剂的一套珊瑚胚胎冷冻保存方案，并对珊瑚水螅体团块的冷冻保存方法开展初步探究等。