基于TRPV4-p38MAPK通路探讨踩跷法抑制腰椎间盘突出症大鼠疼痛敏化的作用机制

Lumbar disc herniation (LDH) is a common clinical disease with high incidence of pain. Caiqiao manipulation is obvious effect for LDH pain.Caiqiao changes anal area,spinal curvature,relative displacement of nerve root and intervertebral disc;enhancing spinal stability by improving both nerve neuroelectric activity and muscle strength of lumbar core muscles.Based on mechanics and electrophysiology effect,we put forward the downstream micromolecular mechanism stheory hypothesis, that“Caiqiao acts on TRPV4 receptor stimulating p38MAPK through TRPV4-p38MAPK pathway,it can inhibition of peripheral sensitization of pain for LDH treatment”.CCD rat model was used to simulate LDH pain,intervening by Caiqiao, using molecular biology technology to observe the changes of TRPV4 and p38MAPK protein,positive positive cells.Verifying the effectiveness from microcosmic point,inhibiting peripheral sensitization of pain by TRPV4-p38MAPK pathway,To provide an objective basis of molecular mechanism for treatment of LDH pain by Caiqiao.

腰椎间盘突出症（LDH）是以疼痛为主的常见病、高发病，踩跷法治疗LDH疼痛疗效显著。前期研究发现踩跷法能通过生物力学效应改变椎管面积、腰椎生理曲度、神经根与椎间盘相对位移，从而缓解神经根卡压粘连；提高腰部核心肌群神经电活动，改善肌力，增强脊柱稳定性。基于踩跷力学、电生理效应，提出“踩跷法通过局部力学刺激，作用于DRG内TRPV4力学感受器，通过TRPV4-p38MAPK通路，调节p38MAPK活性和表达，进而抑制疼痛外周敏化，治疗LDH神经痛”的下游微观分子机制假说。拟用背根神经节受压CCD大鼠模型模拟LDH神经痛，采用踩跷法干预，应用分子生物学技术观察TRPV4、p38MAPK蛋白表达，阳性细胞数。从微观分子角度论证踩跷法治痛有效性及介导TRPV4-p38MAPK通路抑制疼痛外周敏化，为揭示踩跷法治疗LDH疼痛外周分子机制提供客观依据。

背景：踩跷法是治疗LDH的特效推拿技法，临床疗效显著，但因基础研究薄弱，其现代治病机制仍不明确。前期踩跷法研究揭示其力学效应机制，其力学效应下是否存在微观分子效应，机制是什么？运用现代分子生物学方法，深化踩跷法作用机制研究，对踩跷法传承与发展具有重要意义。. 目的：踩跷法作用于DRG内TRPV4力学感受器，通过TRPV4-p38MAPK通路，调节TRPV4、P38MAPK的活性和表达，进而抑制疼痛外周敏化，治疗LDH神经痛。. 结果：本项目构建CCD大鼠模型，采用试制模拟踩跷装置，模拟踩跷法干预（压力1N、频率1.25Hz、时间1min），观察CCD大鼠行为学（机械刺痛及热痛）、分子生物学、免疫组化的影响，探讨踩跷法通过TRPV4-p38MAPK通路改善CCD大鼠疼痛的作用机制。CCD大鼠术后PWL、MWT下降，疼痛基因TRPV4、p38MAPK表达上调，本模型有效还原了腰椎间盘突出症导致的神经病理性疼痛；SB203580与Ruthenium Red，能下调CCD大鼠TRPV4、p38MAPK的mRNA表达，表明TRPV4-p38MAPK通路参与CCD术后神经病理性疼痛过程；踩跷法可提高CCD大鼠术后PWL、MWT阈值，并随时间推移疼痛阈值逐渐提高；PCR、Western blot、免疫组化发现，踩跷法与P38抑制剂SB203580与TRPV4抑制剂Ruthenium Red具有相同作用，能有效地下调p38MAPK、TRPV4的活性，说明踩跷法通过TRPV4-p38MAPK通路，调节TRPV4、p38MAPK的活性和表达。不同部位及不同踩跷周期踩跷均能提高CCD大鼠术后PWL、MWT阈值；亦能下调CCD大鼠背根神经节P38、TRPV4基因和蛋白的表达。. 结论及意义：上述研究发现，踩跷法可通过TRPV4-p38MAPK通路，下调CCD大鼠TRPV4、p38MAPK基因及蛋白表达，这可能是踩跷法抑制腰椎间盘突出神经疼痛敏化的机制之一。本研究从分子生物层面，观察参与神经病理性疼痛调控的TRPV4、P38受体，探讨踩跷法抑制疼痛敏化，为踩跷法作用机制研究提供新思路。