PCP对稀有鮈鲫HPG轴的内分泌干扰作用及分子机制的研究

五氯酚（PCP）影响脊椎动物的内分泌系统，造成人类和野生动物的生殖损害，并可能与近年来人类宫颈癌和卵巢癌等发病率明显增长有关，其内分泌干扰作用机制尚不清楚。本项目用体内外实验结合的方法，从分子水平上研究PCP的内分泌干扰机制。通过原位杂交和Real-time PCR技术，建立PCP对稀有鮈鲫下丘脑-垂体-性腺（HPG）轴的内分泌干扰作用相关基因的表达图谱，分析稀有鮈鲫体内PCP诱导产生的受体介导以及非受体介导（类固醇合成）的内分泌干扰途径；利用质粒共转染技术，RNA干扰和Western-blot技术从细胞水平上研究PCP暴露经受体介导途径行使干扰内分泌干扰作用的受体分子类型及受体介导和非受体介导的内分泌干扰途径，从而揭示PCP暴露对稀有鮈鲫HPG轴内分泌干扰机制以及受体和非受体介导途径的内分泌干扰作用的存在方式。此方面的研究尚未见报道。.本项目拟发表学术论文8篇（SCI4篇或以上）。

五氯酚（PCP）影响脊椎动物的内分泌系统，造成人类和野生动物的生殖损害，并可能与近年来人类宫颈癌和卵巢癌等发病率明显增长有关，其内分泌干扰作用机制尚不清楚。本项目利用Real-time PCR技术以HPG轴为依据建立了HPG轴组织（大脑，性腺，肝脏）相关的稀有鮈鲫已知的卵黄蛋白原组基因（VTG1，VTG2），类固醇受体组基因（AR，ERalpha，ERbeta1，ERbeta2）和细胞色素组基因（CYP3A，CYP17，CYP19a，CYP19b）10个基因的诱导谱，克隆未知新基因HMGR、HSP70、HSP90、p53并建立诱导谱和除p53外的组织表达图谱。在国内外首次建立了PCP诱导的HPG轴内分泌相关的部分基因表达图谱，从基因水平明确了PCP是通过HPG轴影响内分泌系统，PCP内分泌干扰是受体途径和非受体途径共同作用完成的；PCP的细胞毒性研究，PCP对细胞的抑制在10-5-10-4 mol/L之间作用效果较明显，当作用48h后，细胞的抑制情况与PCP的浓度呈现一定的线性关系；选取25，50，100，200uM的PCP暴露浓度，以MCF-7（ER alpha阳性表达株）细胞为研究对象，在ER alpha存在时，运用real-time PCR检测ER alpha，StAR，CYP17A1，CYP19A1，17β-HSD，GAPDH基因在不同浓度的PCP暴露48h后的表达情况，分析PCP的体外内分泌干扰途径。