微小RNA let-7f/mir-27b促进内皮祖细胞修复糖尿病血管损伤的机制

我国约有10%成年人患糖尿病，而伤口不愈所致截肢是其重要并发症。我们前期工作表明血管内皮祖细胞（EPC）功能障碍与糖尿病伤口局部血管新生不良及伤口不愈合密切相关。线粒体锰超氧化物歧化酶(MnSOD)活性降低、氧化应激增强,以及内源性抗血管新生因子TSP-2分泌增加是EPCs功能障碍的重要机制。与血管新生相关的微小RNA let-7f与mir-27b具有改善EPCs功能和促进伤口愈合的作用，但机制尚不清楚。促氧活性物质生成的蛋白p66shc与腺苷酸活化蛋白激酶AMPK都与MnSOD活性关系密切。 预实验结果显示：1）mir-27b通过下调p66shc表达从而抑制血管新生；2）let-7f通过抑制蛋白磷酸酶PP2A、失活AMPK从而抑制血管新生。因此本项目将深入探讨微小RNA let-7f 和mir-27b改善EPC血管新生的机制，为糖尿病伤口愈合的基因治疗与EPC细胞治疗提供理论依据。

我国约有10%成年人患糖尿病，而伤口不愈所致截肢是其重要并发症。我们前期工作表明血管内皮祖细胞（EPC）功能障碍与糖尿病伤口局部血管新生不良及伤口不愈合密切相关。与血管新生相关的微小RNA let-7f与mir-27b具有改善糖尿病小鼠EPC功能和促进伤口愈合的作用，但机制尚不清楚。.本项目研究发现，let-7f与mir-27b对糖尿病EPC功能的改善作用与其上调MnSOD表达、降低氧化应激水平有关；糖尿病EPC的高氧化应激水平可导致TSP-2分泌增加，进而损伤EPC功能；let-7f可通过调节PP2A-AMPK通路影响糖尿病EPC线粒体MnSOD活性及氧化应激水平，进而影响糖尿病EPC功能。探讨mir-27b对糖尿病EPC表达p66shc调节作用时，分别用mir-27b模拟物与抑制剂处理正常或糖尿病小鼠EPC，观察p66shc mRNA和蛋白表达。结果显示，mir-27b模拟物可显著降低EPC的p66shc mRNA和蛋白表达，而mir-27b抑制剂可显著增加EPC的p66shc mRNA和蛋白表达。探讨mir-27b调节糖尿病EPC p66shc对MnSOD的作用时，分别用mir-27b抑制剂、p66shcsiRNA处理利用正常或糖尿病小鼠EPC观察MnSOD蛋白表达和活性。结果显示，mir-27b抑制剂可显著降低EPC的MnSOD蛋白表达和活性，而p66shc siRNA处理可以明显抑制mir-27b抑制剂对EPC的MnSOD蛋白表达和活性的作用。另外研究还发现，局部给予let-7f/mir-27b模拟物可促进糖尿病小鼠伤口愈合。. 综上所述，本项目研究证实：糖尿病EPC中促血管新生的微小RNA let7f/mir-27水平下降，从而使p66shc和PP2A、AMPK水平失调，进而降低MnSOD水平和活性、升高氧化应激水平与TSP-2表达，从而损伤EPC的促血管新生功能，最终导致伤口难以愈合。该研究为糖尿病伤口的微小RNA基因治疗或EPC细胞治疗提供了理论依据与实验支持。