微核糖核酸对内皮型一氧化氮合酶基因表达的调节及其分子机制研究

前期工作发现内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因中第4内含子的27碱基重复子产生相应的27碱基微核糖核酸（microRNA）,并对eNOS的转录和表达有明显的抑制作用。为进一步阐明该microRNA 对eNOS基因表达调节的分子机制，探讨其对细胞功能的影响，拟进行的研究用小片段RNA亚克隆技术构建该microRNA高表达质粒，并在血管内皮细胞中表达，观察细胞结构、功能变化；用骨髓干细胞定向内皮性分化, 检测细胞内27碱基microRNA、eNOS mRNA表达动态变化及其对细胞定向分化和增殖的影响；用链亲和素生物素磁珠分离法从内皮细胞胞浆蛋白和核蛋白中筛选和验证与27碱基microRNA相互作用的蛋白分子。该项目的完成将为进一步明确27碱基microRNA对组织细胞功能的影响、阐明microRNAs对真核基因表达调节的分子机制提供依据。