LncRNA-BF058204在大肠癌肝转移中的作用和机制研究

The tumor invasion and liver metastasis features are important factors affecting the prognosis of patients with colorectal cancer.The research on liver metastases of colorectal cancer is of great clinical significance and scientific value because it may block or delay the metastatic process.Most studies show that LncRNA is involved in metastatic invasion of cancers. Previously, we have identified a long non-coding RNA BF058204 as one of the up-regulated genes in colorectal cancer patients with liver metastasis by a microarray platform. In this project, we choose BF058204 as the major target and various analytical methods are used to evaluate the role and molecular regulation mechanism of LncRNA-BF058204 in the liver metastasis of colorectal cancer.Then the interaction of LncRNA-BF058204 and PRC2 complex EZH2, the role of SAPK/JNK and PI3K/AKT signaling pathway are demonstrated in the process of liver metastasis of colorectal cancer.This project will help to build new cancer treatment method and provide a strong theoretical support for the development of using foreign synthetic LncRNA as apparent genetics drug therapy and reversal of metastatic invasion of colorectal cancer.

大肠癌显著的肝转移特性是影响患者预后的重要因素，针对大肠癌肝脏转移展开相应的研究可在一定程度上阻滞或延缓其进程，具有重要的临床意义及科研价值。研究表明LncRNA参与恶性肿瘤的发生和侵袭转移调控。我们应用LncRNA芯片筛选发现LncRNA-BF058204在IV期肝转移的大肠癌组织中表达明显上调，故选择BF058204作为大肠癌肝转移研究的靶点，利用生物信息学、RNA免疫沉淀、基因克隆、过表达等手段研究BF058204在大肠癌生长和肝转移级联反应中的作用及分子调控机制，其是否通过与PRC2 复合物、EZH2的相互作用促进大肠癌的肝转移；并分析JNK、PI3K/AKT信号通路在该过程中的作用；探讨逆转BF058204表达来阻止大肠癌肝转移的可能性。本项目将有助于人们开发新的癌症治疗方法，为发展使用外源合成的LncRNA作为表观遗传学药物治疗及逆转大肠癌的浸润转移提供有力的理论支持。

大肠癌显著的肝转移特性是影响患者预后的重要因素，针对大肠癌肝脏转移展开相应的研究可在一定程度上阻滞或延缓其进程，具有重要的临床意义及科研价值。研究表明 LncRNA 参与恶性肿瘤的发生和侵袭转移调控。我们应用 LncRNA 芯片筛选发现LncRNA TCONS_00026334在 IV 期已发生肝转移的结直肠癌组织中表达明显下调，故选择LncRNA TCONS_00026334作为结直肠癌侵袭转移研究的靶点，并命名为CRAPLINC(Colorectal Adenocarcinoma Predictive Long Intergenic Non-Coding RNA)。首先，收集86例结直肠癌组织及配对癌旁组织，分析大样本量大肠癌组织中CRAPLINC的表达，并进行临床资料的关联分析，结果显示CRAPLINC与结直肠癌预后相关的血清CEA水平，肿瘤大小以及淋巴结转移明显相关；随后检测5种CRC细胞系中CRAPLINC的表达情况，采用RACE实验确定CRAPLINC的全长序列，构建CRAPLINC过表达细胞株，及转染siRNA的方法干扰CRAPLINC的表达进行功能学验证。结果显示干扰CRAPLINC表达后， HT29细胞的增殖活性明显增加（P＜0.01），侵袭能力显著增加1.6倍。在过表达CRAPLINC后， HCT116细胞的增殖活性明显降低（P＜0.001），侵袭活性降低3.15倍。通过生物信息学技术，发现CRAPLINC的片段与miR-548n可以相互结合，首先我们在30对结直肠癌组织标本中进行验证，结果显示miR-548n在大肠癌中呈现高表达，并且与CRAPLINC呈现负相关；另外发现miR-548n与TP53INP1呈负相关。同时我们过表达miR-548n发现TP53INP1以及其下游分子p21，PIG3和MDM2 mRNA表达水平下降；并通过裸鼠体内试验进一步验证上述假设。这些发现表明lncRNA CRAPLINC作为一个肿瘤抑制基因在结肠癌中发挥作用，CRAPLINC能够抑制结肠癌的增殖和侵袭能力，在结肠癌的发生发展过程中起着关键的作用，可作为未来的结肠癌治疗的一个潜在的分子治疗靶点。本研究初步探索LncRNA变异导致大肠癌肝转移的具体作用机制以及将逆转LncRNA变异作为预防大肠癌转移策略的可能性。