牙周膜干细胞促进犬全脱出牙齿延迟再植后牙周愈合的研究

牙齿全脱出后延迟再植最常见的并发症是替代性吸收，严重影响再植牙的成功率，其主要原因是牙周膜的完整性受到破坏。牙周膜尤其是牙周膜干细胞在维持牙周组织微环境稳定、阻止替代性吸收方面起到了重要作用。本课题组建立了比格犬牙齿全脱出动物模型，计划在已有研究基础上，通过免疫荧光技术检测再植后早中晚期牙周组织中相关炎症因子、细胞因子、信号分子和转录因子表达的变化，分析牙周膜在再植牙齿愈合过程中的作用机理。在体外分离鉴定犬牙周膜干细胞的基础上，采用细胞膜片技术结合选择性调高转录因子Msx2的表达，或局部应用二磷酸盐化合物，观察延迟再植牙齿牙周组织的愈合情况，并通过细胞培养、逆转录病毒转染、RT-PCR、免疫荧光等技术探讨牙周膜干细胞在延迟再植牙周组织愈合过程中的作用。本项目研究结果有助于揭示全脱出牙齿的牙周愈合机制，改进全脱出牙齿延迟再植的治疗方法，为牙齿再生的组织工程学提供理论基础。

牙根外吸收是全脱出牙齿延迟再植常见的并发症之一，主要原因是牙周膜的损伤和坏死。如果外伤后能够保存更多的牙周膜组织细胞，将大大提高全脱出延迟再植牙齿的预后。本研究旨在比较储存介质脱脂巴氏牛奶和Hank’s平衡盐溶液对牙周膜干细胞活性和成骨分化的影响，分析根面处理剂阿仑膦酸钠对牙周膜干细胞增殖和分化能力的影响，并尝试通过组织工程学方法促进全脱出延迟再植牙齿牙周组织的愈合，减少牙根吸收的发生。. 实验获得的人牙周膜干细胞表达间充质干细胞相关的标记物，具有克隆形成能力、体外多向分化能力，在免疫缺陷小鼠皮下能够形成牙骨质-牙周膜样结构。 在保存牙周膜干细胞活力方面，脱脂巴氏牛奶的效果优于Hank’s平衡盐溶液，差异具有统计学意义（P<0.05）；在对牙周膜干细胞成骨分化能力的影响方面， 脱脂巴氏牛奶组和Hank’s平衡盐溶液组形成的矿化结节少于正常培养液组，而且Hank’s平衡盐溶液组的下降更明显，差异具有统计学意义（P<0.05）。 阿仑膦酸钠在0.01nM~1μM浓度范围内能够促进牙周膜干细胞的增殖，其中0.01μM的作用最明显。阿仑膦酸钠对牙周膜干细胞矿化结节的形成、碱性磷酸酶和成骨相关基因的表达有促进作用；在1nM~1μM范围内，浓度越高，促进作用越明显。相反，阿仑膦酸钠对牙周膜干细胞形成脂滴和成脂相关基因的表达有抑制作用；浓度越高，抑制作用越明显。与人牙周膜干细胞相似，犬牙周膜干细胞也表达间充质干细胞相关标记物，具有克隆形成能力和多向分化能力。通过分析各组再植牙齿的根尖片，本研究发现，加入了牙周膜干细胞的延迟再植组牙根吸收和固连发生率低于未加入细胞组，即刻再植组的牙周愈合最好。. 因此，与Hank’s平衡盐溶液相比，脱脂巴氏牛奶保存牙周膜干细胞活性和成骨分化能力的效果更好。因此，脱脂巴氏牛奶是一种良好的全脱出牙齿储存介质。适宜浓度的阿仑膦酸钠能够促进牙周膜干细胞的增殖和成骨分化能力，抑制其成脂分化能力；提示阿仑膦酸钠具有促进全脱出牙齿延迟再植牙周组织愈合的潜力。牙周膜干细胞膜片在一定程度上有助于减少全脱出牙齿延迟再植后牙根吸收和固连的发生率，具有促进牙周组织愈合的潜力。