TLR7/8活化增强经典型单核细胞源性树突状细胞交叉抗原递呈功能的研究

我们已发表的工作显示，TLR7/8激活物通过作用于免疫注射局部浸润的经典型单核细胞，促进其成熟分化为树突状细胞（Mo-DC）,增强对乙肝病毒表面抗原（HBsAg）的细胞免疫应答反应。本研究将重组纯化的HBsAg与TLR7/8激活物包裹，采用来源于野生型或MyD88基因敲除小鼠，分析浸润到组织中的经典型单核细胞在TLR7/8活化后，影响其成熟分化的细胞因子表达谱以及其成熟分化后的表型特征，并重点探讨在TLR7/8活化后，细胞外的疫苗性抗原物质如何进入到抗原提呈细胞自身的MHC-I加工途径，产生MHC-I/抗原多肽复合物，进行有效交叉抗原提呈，激发特异性CD8+T细胞活化的分子机制。并利用具有人MHCⅠ类分子抗原递呈功能的HLA-A2/HBV双转基因鼠，探讨在慢性持续性HBV感染状态下，在小鼠体内诱导出特异性的抗HBs和针对HBV感染细胞的特异性CD8+T细胞的可行性。

此项目之前我们的工作发现TLR7/8激活剂通过活化血单核细胞源性树突状细胞（MoDC）可增强HBsAg免疫原性。本研究旨在探讨在TLR7/8激动剂存在时，能否克服机体存在的对特定抗原的免疫耐受而诱导出特异性免疫反应，及MoDC在TLR7/8活化后进行抗原交叉递呈的分子机制。主要结果如下：采用氢氧化铝为载体，我们制备了可偶联HBV-Ag和TLR7/8激活剂(CL097)的颗粒性抗原，采用高效液相色谱与质谱连用技术确定了相关成分的比例，发现CL097与HBV-Ag在空间结构中的相近性是诱导MoDC活化进行抗原递呈、活化特异性T细胞的关键。进而采用两种HBV转基因小鼠 (AlblHBV和HBV-1.3)，分析了偶联HBV-Ag和CL097的颗粒性抗原诱导特异性免疫反应的效应。结果显示分别有8/11的AlblHBV小鼠和10/13的HBV-1.3 小鼠产生了针对耐受原的抗-HBs抗体和HBsAg特异性IFN-g产生的CD4+和CD8+T细胞，免疫小鼠体内Treg细胞比例降低，采用铝佐剂负载HBV-Ag免疫则无此效应产生，提示了TLR7/8活化的重要作用。进而，采用体外培养的MoDC，采用质谱分析方法，检测了CL097刺激后对进行MHC-I类和MHC-II类分子途径抗原递呈相关分子表达的影响，发现CL097刺激的MoDC能显著增强某些参与MHC-I类抗原递呈途径相关分子的表达，但对MHC-II类抗原递呈途径的分子作用不明显。表明1)通过活化MoDC的TLR7/8途径，主要增强了对CD8+T细胞的活化，TLR7/8激活剂是一种潜在的在免疫耐受状态下诱导抗原特异性Th1应答的良好佐剂; 2)对抗原无应答特性的T细胞，可通过活化MoDC的TLR7/8通路增强其抗原递呈功能而诱导出特异性免疫应答反应。