益气化瘀法介导成纤维细胞TGF-β/ALK影响smad1,2,3,5平衡改善创面愈合的机制研究

Diabetic ulcers are a common and serious complication of diabetes mellitus that are associated with rising incidence rate and high medical cost burden. For this disease.Signal transduction of TGF-β/ALK/smad has two pathways.One relates to neovascularization and the other relates to antagonism of ALK1 signal pathway and fibrosis.The balance between pathways relates to the speed and quality of wound adhesion.We have proved the chinese herbs for replenishing qi and resolving stagnation can accelerate the wound healing, reduce expressions of Smad3、Smad4, promote expression of VEGF induce angiogenesis. Based on these results,we plan to use replenishing qi and resolving stagnation herbs and deferent control therapies to treat rat model of diabetes ulcers, By using western-blot and immunohistochemistry techniques to compare different expression of signal transducer molecule(including ALK1、5；smad1、2、3、5, micro vessel counts,scar index,and so on) in this two pathways,we can find out the focal point of traditional Chinese medicine. Therefore this research has significance scientific value and can improve the clinical efficacy of TCM to accelerate diabetic ulcer healing.

糖尿病性溃疡是糖尿病主要、常见而严重的慢性并发症，发病率高，危害大，治疗难度大。研究发现，转化生长因子-β/ALK/smad信号传导的2条通路相互拮抗，并分别与新生血管形成及纤维化有关，因此，两者之间的平衡同时关系到创面的愈合速度及质量。在既往临床实践和前期研究证实益气化瘀法促糖尿病溃疡愈合及能下调Smad3、Smad4 的表达水平并能促使血管新生基础上，本研究拟以益气化瘀法及其拆方为观察对象，通过糖尿病溃疡创面模型，运用分子生物学、免疫组织化学等技术，检测创面成纤维细胞ALK1、5；smad1、2、3、5的水平，分析两条通路的动态变化，在原有工作基础上更深入的探讨益气化瘀法促进血管生成、加速创面愈合，同时减少瘢痕形成的中间作用机制及通路，深化中医药促进糖尿病溃疡愈合的作用机制，为中医药促进糖尿病溃疡疮面修复提供全面深入的治疗靶点，对提高疮面修复水平有重要意义。

一、研究背景：糖尿病性溃疡是糖尿病常见而严重的慢性并发症。研究发现TGF-β/ALK/smad信号传导的2条通路相互拮抗，并分别与新生血管形成及纤维化有关。本研究拟以益气化瘀法及其拆方为观察对象，分析两条通路的动态变化，深入探讨益气化瘀法促进血管生成、加速创面愈合，同时减少瘢痕形成的中间作用机制及通路。.二、主要研究内容：通过注射链脲佐菌素的给药方法建立糖尿病模型，通过外科手术方法建立糖尿病性溃疡创面大鼠模型，运用分子生物学和免疫组织化学等方法检测各组创面成纤维细ALKl 、5；smad1、2、3、5含量水平的影响，阐明益气化瘀法通过调节TGF-β/ALK/Smad信号通路，调控创面修复过程中血管生成，控制纤维化从而加速创面愈合，改善愈合质量的可能的作用机制及靶点。.三、重要结果、关键数据：1.肉芽增生期糖尿病模型组ALK1、smad1、smad5表达水平明显低于正常组(P<0.01)；益气化瘀组ALK1表达水平明显高于糖尿病模型组(P<0.01)且smad1、 smad5高于糖尿病模型组(P<0.05)。肉芽增生期糖尿病模型组ALK5、smad3表达水平明显高于正常组(P<0.01)且smad2表达水平高于正常组(P<0.05)；益气化瘀组ALK5表达水平明显低于糖尿病模型组(P<0.01)，smad2、smad3表达水平低于糖尿病模型组(P<0.05)。2.瘢痕形成期各组ALKl、smad1、smad5的表达水平均无明显差别。糖尿病模型组ALK5 、smad3表达水平明显高于正常组(P<0.01)且smad2表达水平高于正常组(P<0.05)；益气化瘀组、益气组、化瘀组ALK5表达水平明显低于糖尿病模型组(P<0.01)，益气化瘀组smad2表达水平低于糖尿病模型组(P<0.05)，益气化瘀组smad3表达水平明显低于糖尿病模型组(P<0.01)。.四、科学意义：结果提示糖尿病性溃疡肉芽增生期生长迟缓可能与TGF-β／ALK／Smad途径有关，且益气化瘀中药可能能通过调节其水平，促进血管新生，从而加速肉芽形成。同时在瘢痕形成期，瘢痕形成的原因可能也与该途径有关。益气化瘀组及其拆方组能不同程度的抑制ALK5／Smad2／3通路，减少瘢痕形成。本研究探讨了益气化瘀法促进血管生成加速疮面愈合，减少瘢痕形成的中间机制及通路，为提高中医药创面修复水平有重要意义。