基于“肠道菌群—肠上皮细胞”途径，研究调肝运脾方对D-IBS肠粘膜机械屏障的保护机制

Diarrhea-dominant irritable bowel syndrome is a clinical common functional gastrointestinal disease, but there is still no effective drug treatment. Research group of long-term clinical practice confirmed that Tiao Gan Yun Pi decoction can significantly improve symptoms of D-IBS patients, combined with previous research results and literature investigation, we think that balance the way of“ intestinal flora - intestinal epithelial cell" , may be a new mechanism of Tiao Gan Yun Pi decoction in the treatment of D-IBS. . This research through establishment of theoretical model in vivo and in vitro, and use the means of molecular biology, such as 454 pyrophosphate sequencing to clarify Tiao Gan Yun Pi decoction can multimode effect on the way of “intestinal flora-intestinal epithelial cells” to relieve the damaged intestinal mucosal mechanical barrier of D-IBS, its key target may depend on adjusting upper intestinal flora, directly or indirectly antagonism downstream TLR2 / TLR4 receptor, and protect the intestinal epithelial cells.. This study will further clarify the treatment mechanism of Tiao Gan Yun Pi decoction in D-IBS from a new perspective , deepen the modern scientific essence of traditional Chinese medicine treatment of D-IBS, provide reliable experimental basis for the development of new drugs have independent intellectual property rights and has considerable clinical application value and market prospect..or indirectly antagonism downstream TLR2 / TLR4 receptor, and protect the intestinal epithelial cells.

腹泻型肠易激综合征（D-IBS)是临床常见的慢性功能性胃肠病，但目前仍缺乏行之有效的治疗药物。课题组长期临床实践证实调肝运脾方可显著改善D-IBS患者症状，结合前期研究成果及文献调查，我们认为恢复“肠道菌群-肠上皮细胞”途径的平衡，有可能是调肝运脾方治疗D-IBS的新机制。.本课题通过建立体内、体外理论模型、采用454焦磷酸测序等分子生物学手段，阐明调肝运脾方可多方式作用于“肠道菌群—肠上皮细胞”途径，缓解D-IBS肠粘膜机械屏障受损，其关键靶点有可能与调节上游肠道菌群，间接或直接拮抗下游TLR2/TLR4受体，保护肠上皮细胞有关。.本研究从新的角度更加深入阐明调肝运脾方治疗D-IBS的作用机制，深化了传统中医药治疗D-IBS的现代科学本质，为开发拥有自主知识产权的新药物提供可靠的实验依据，具有可观的临床应用价值和市场前景。

腹泻型肠易激综合征（D-IBS）是临床常见的慢性功能性胃肠病，但目前仍缺乏行之有效的治疗药物。课题组长期临床实践证实调肝运脾方可显著改善D-IBS患者症状。本项目通过建立体内、体外实验，观察调肝运脾方缓解D-IBS肠粘膜机械屏障受损的机制。.体内研究发现：调肝运脾方除了能降低D-IBS模型大鼠内脏高敏感，减轻肠黏膜低度炎症，缓解胃肠动力亢进外，对改善肠黏膜机械屏障受损亦有良好的作用，其作用机制与下调TLR4、MyD 88、NF-κB表达及TNF-a、IFN-γ水平，上调肠上皮紧密连接蛋白Occludin-1、ZO-1、Claudin-1水平有关。研究进一步发现，调肝运脾方可纠正其上游肠道菌群及其代谢物短链脂肪酸紊乱，降低LPS有关，具体表现为：调肝运脾方低剂量组可降低Ace指数，增加菌群丰度，升高Simpson指数，增加肠道菌群多样性。但调肝运脾方高剂量组对Ace指数、Simpson指数无明显作用。在门分类水平上，调肝运脾方低、高剂量组增加Bacteroidetes比例，降低Firmicute比例；在属分类水平上，调肝运脾方低剂量下调雷沃氏菌属（Prevotella）、Lachnospiraceae_NK4A136_group、拟杆菌属（Bacteroides），上调脱磷孤菌属（Desulfovibrio）、乳酸菌属（Lactobacillus）。另外，对肠道菌群代谢物丁酸，亦有良好的上调作用。但调肝运脾方高剂量组对Lachnospiraceae_NK4A136_group、Bacteroides菌属及短链脂肪酸作用不明显。在体外实验中，予LPS刺激Caco-2细胞建立肠上皮细胞屏障受损模型，发现调肝运脾方可剂量依赖性地下调TLR4、MyD 88、NF-κB表达及TNF-α、IFN-γ水平，上调肠上皮紧密连接蛋白Occludin、ZO-1、Claudin-1。.综上所述，本研究阐明调肝运脾方可作用于“肠道菌群—肠上皮细胞”途径，缓解D-IBS肠粘膜机械屏障受损，其关键靶点有可能与调节上游肠道菌群紊乱，拮抗下游TLR4受体，保护肠上皮细胞紧密连接蛋白有关，为调肝运脾方治疗D-IBS提供了新的思路与方法。