调肠针法保护脓毒症肠粘膜屏障的肠胆碱能抗炎通路及其协同拮抗机制

It is very important to protect intestinal mucosal barrier at sepsis. In clinical, we use Tiaochang acupuncture for treatment and achieved desired effect. According to previous studies, electro-acupuncture at Zusanli can protect intestinal mucosal barrier by activating systemic cholinergic anti-inflammatory pathway. The intestine is the primary target organ of Zusanli, but the mechanism of acupuncture at Zusanli on intestinal cholinergic system and mucosal immune system is still unclear. And there is very little study about other common acupoints and acupoint group prescriptiongs for the cholinergic anti-inflammatory pathway. In this study, we will first establish a postsplenectomy laboratory sepsis model in rats. In the state of excluding systemic cholinergic anti-inflammatory pathway, the effect of electro-acupuncture at Zusanli on the intestinal cholinergic system and mucosal immune system will be evaluated. The expression of CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells, Th17 , and other laboratory index will be used to evaluate the intestinal inflammatory/anti- inflammatory station and the mucosal barrier function. Nicotine(α7nAchR receptor agonist) and α-bungarotoxin(α7nAchR receptor antagonist) will be used as control measures. According to the characteristics that vagus nerve can activate cholinergic anti-inflammatory pathway, the effect of different Tiaochang acupoint group prescriptions to systemic inflammatory response syndrome and intestinal mucosal barrier will also be evaluated at sepsis model in rats, thus to provide a scientific basis for optimizing treatment.

维护肠粘膜屏障在脓毒症治疗中具有重要意义，我们在临床上应用调肠针法进行治疗取得了良好的效果。根据现有研究，电针足三里可通过激活全身性胆碱能抗炎通路发挥治疗作用，但对其主要效应器官——肠道的胆碱能免疫系统的作用尚不明确，临床其他常用穴位及其处方组合对胆碱能抗炎通路的影响亦缺乏研究。本项目拟通过建立脾切除后脓毒症大鼠模型，在剔除全身性胆碱能抗炎通路影响的状态下，应用α7nAchR激动剂烟碱、α7nAchR拮抗剂α-银环蛇毒作为对照，以CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞、辅助性T细胞17等作为观察指标，从炎症/抗炎平衡角度探讨电针足三里对脾切除后脓毒症大鼠肠道胆碱能系统及其粘膜免疫的影响。同时根据胆碱能抗炎通路依赖于迷走神经兴奋的特性，探讨中医调肠针刺法不同穴位组方对脓毒症大鼠全身炎症反应及肠粘膜屏障功能的影响，为优化脓毒症肠功能障碍的针刺治疗方案提供科学依据。

维护肠黏膜屏障在脓毒症治疗中具有重要意义，我们在临床上应用调肠针法进行治疗取得了良好的效果。既往研究提示电针足三里可通过激活胆碱能抗炎通路发挥治疗作用，但对其主要效应器官——肠道免疫系统的作用尚不明确，其他临床常用穴位对胆碱能抗炎通路的影响亦缺乏研究。.本项目建立脓毒症大鼠模型，应用α7nAchR激动剂GTS21作为对照，以肠道淋巴结、肠黏膜CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞（Treg）、辅助性T细胞17（Th17）等作为观察指标，比较足三里穴、曲池穴、天枢穴对胆碱能抗炎通路、肠黏膜屏障以及肠黏膜免疫的影响。研究发现电针足三里穴、曲池穴均能降低脓毒症大鼠血浆中TNF-a、IL-10、DAO、D-LA水平，提示足三里穴、曲池穴能减轻脓毒症大鼠的全身炎症反应、保护肠黏膜屏障功能，且两者的效应相近，而天枢穴则不具有此效应。此外，研究发现足三里穴、曲池穴、天枢穴及GTS21均能纠正脓毒症大鼠的肠道免疫紊乱，表现为上调肠道淋巴结、肠黏膜中的CD4+细胞、Treg细胞，下调CD8+细胞、Th17细胞。结合其他研究，提示足三里穴、曲池穴等具有激活副交感神经作用的穴位，可能都具有激活胆碱能抗炎通路的作用，而天枢穴等激活交感神经为主的穴位，则可能通过其他途径发挥对脓毒症大鼠肠道黏膜免疫的调节作用。.项目进一步建立脾切除后脓毒症大鼠模型，研究发现在脾切除的状态下，电针足三里的抗炎效应消失，但对肠黏膜屏障功能仍具有一定的保护作用，但这种保护作用被明显削弱。而α7nAchR激动剂GTS21仍具有明显的抗炎、保护肠黏膜屏障功能的作用，提示脾脏是电针足三里穴发挥抗炎作用的主要效应器官。此外，研究还发现在切除脾脏的情况下，电针足三里穴仍能纠正大鼠肠道淋巴结、肠黏膜Treg/Th17细胞的紊乱，提示电针足三里穴可能通过胆碱能抗炎通路以外的途径发挥调节肠道黏膜免疫的作用，进而在脾切除状态下起到一定的维护肠黏膜屏障作用。