藤梨根有效组分阻断c-Met-YAP/TAZ信号通路抑制胃癌CSLCs干性维持的作用机制研究

Cancer stem-like cells (CSLCs) are the most common cause of .cancer metastasis and drug resistance. Our preliminary data showed that the active component of Radix Actinidiae chinensis suppress the protein expression of c-Met and inhibit the stemness of gastric CSLCs. Moreover, our data suggested that activation of c-met could promote the transcription co-activation of YAP/TAZ in gastric cancer cells, which might play an important role in the stemness maintenance of gastric CSLCs. Therefore,we propose the hypothesis that active components of Radix Actinidiae chinensis inhibit stemness of gastric CSLCs through blockage of the cMet-YAP/TAZ signaling pathway. We plan to apply technologies such as with gastric cancer xenografts and in situ proximity ligation assay to test this hypothesis.In our proposal, we aim to: clarify the inhibition of stemness of gastric CSLCs by the active components of Radix Actinidiae chinensis; clarify the molecular mechanism underlying how active components of Radix Actinidiae chinensis inhibit the stemness of gastric CSLCs through suppression of cMet; clarify the molecular mechanism underlying how active components of Radix Actinidiae chinensis inhibit the stemness of gastric CSLCs through blockage of the cMet-YAP/TAZ signaling pathway. Our research will not only lay the scientific foundation for the clinical application of Radix Actinidiae chinensis, but also provide new direction for future studies on Chinese traditional medicine for cancer therapy.

肿瘤干样细胞(CSLCs)是肿瘤转移和复发耐药的根源。我们在前一基金项目研究基础上，发现藤梨根有效组分下调胃癌细胞c-Met和抑制胃癌细胞的干性维持，进一步研究发现c-Met激活可促进胃癌细胞YAP/TAZ的转录共激活功能，进而在胃癌CSLCs干性维持中发挥重要作用。基于此，我们提出藤梨根有效组分阻断c-Met-YAP/TAZ信号通路抑制胃癌CSLCs干性维持的科学假说。围绕该科学假说，我们应用荧光素酶标记胃癌裸鼠模型、分选流式、原位邻近连接等技术：明确藤梨根有效组分抑制胃癌CSLCs干性维持的作用效应；阐明藤梨根有效组分下调c-Met抑制胃癌CSLCs干性维持的分子机制；揭示藤梨根有效组分阻断c-Met-YAP/TAZ信号通路抑制胃癌CSLCs干性维持的作用机制。通过本项目研究，不仅为中药藤梨根有效组分的研发和临床应用提供科学依据，而且为中医药抗肿瘤治疗提供新思路。

本课题通过细胞实验与动物实验应用藤梨根有效组分对于胃癌CSLCs干性维持的作用及机制进行研究。运用胃癌组织芯片，流式细胞术，成球实验、克隆形成实验、 Transwell 小室侵袭实验、 RT-PCR检测、免疫印迹实验、裸鼠转移瘤模型等方法对藤梨根有效组分胃癌 CSLCs干性维持的作用效应、其阻断 c-Met-YAP/TAZ 信号通路抑制胃癌 CSLCs干性维持。结果显示：（1）藤梨根有效组分能够有效抑制MGC803、BGC823、AGS细胞的迁移和侵袭；能够有效抑制MGC803细胞的成球能力；50μM的熊果酸能够显著上调MGC803和AGS细胞P-AKT蛋白表达水平，下调P-P65、P-stat3（Y705）、β-catenin蛋白表达水平；Met和YAP在胃癌组织中表达明显升高，Met和YAP与CD133的表达具有正相关性。（2）有效组分对肿瘤细胞活性具有抑制作用，CD133活性呈时间与浓度积累作用；能够抑制醛脱氢酶(ALDH)的活性，且呈时间累积作用；减少肿瘤细胞（HGC27、AGS）的细胞成球体积与成球数目，有效抑制胃癌细胞的自我更新能力；减少细胞的克隆，增强HGC27和AGS对顺铂药物的敏感性；有效组份能够抑制Sox2、Klf4、Nanog、Oct4、ALDH1A1和c-Myc的mRNA的表达，并呈一定的时间依赖性；能够降低Sox2、Klf4、Nanog、Oct4、ALDH1A1和c-Myc的蛋白表达水平，也具有一定的时间依赖性。（3）有效组分能够明显抑制胃癌细胞的转移，且高剂量组优于低剂量组；c-Met沉默时，c-Met蛋白表达明显减少，CD133与蛋白醛脱氢酶(ALDH)的活性明显减低，c-Met过表达时，c-Met蛋白表达明显增多，CD133与蛋白醛脱氢酶(ALDH)的活性明显增加，藤梨根有效组分处理后，CD133与蛋白醛脱氢酶(ALDH)的活性减低，胃癌细胞的细胞成球体积与成球数目明显减少，克隆明显变小且稀疏，对顺铂药物敏感性增强；藤梨根有效组分处理后，c-Met、YAP、TAZ蛋白表达水平明显减少。综上所述，藤梨根有效组分能够有效抑制胃癌 CSLCs 干性维持的作用效应，下调c-Met并通过阻断 c-Met-YAP/TAZ 信号通路抑制胃癌 CSLCs干性维持的作用。项目资助发表SCI论文4篇，核心论文4篇，培养硕士研究生3名，博士研究生3名。