芍药甘草汤调节高胆固醇血症兔Oddi括约肌肌细胞运动信号传导机制的研究

Oddi括约肌功能障碍（SOD）是临床常见病，严重影响人类生活质量，为括约肌痉挛和继发病理改变,目前尚无有效治疗方法。中医认为SOD 属胁痛、黄疸范畴。芍药甘草汤常用缓急止痛、肝脾不和、 酸甘化阴，具有明显解痉和舒张平滑肌作用，也可松弛Oddi括约肌，降低其压力，但确切的机理还不清楚。研究证明：高胆固醇血症可引起兔SOD，与［ Ca2+］i增加和钙、钾离子通道改变有关。本研究采用分子生物学、激光扫描共聚焦显微镜、细胞生物学和电生理（细胞膜片钳）等实验手段，以高胆固醇血症家兔Oddi括约肌及肌细胞为研究对象，研究芍药甘草汤含药血清及其有效成分芍药甙、甘草酸对高胆固醇血症兔 Oddi括约肌肌环、肌细胞运动及肌细胞［ Ca2+］i机制、相关钙、钾离子通道的影响，确定其发挥调控作用的信号转导机制。从电生理、离子通道和细胞信息学的角度探讨其调节Oddi括约肌的机理，为中西医结合治疗SOD提供依据。

Oddi 括约肌运动功能障碍( sphincter of Oddi dysfunction ,SOD) 是临床上一种常见病、目前尚无有效治疗方法。本课题采用分子生物学、激光扫描共聚焦显微镜、细胞生物学和电生理（细胞膜片钳）等手段，研究芍药甘草汤及含药血清及其有效成分芍药甙、甘草酸对高胆固醇血症兔（SOD模型） Oddi括约肌肌环、肌细胞运动调节、［ Ca2+］i机制、相关离子通道的影响，确定其发挥调控作用的信号转导机制。.本课题解决了以下重要问题：高胆固醇血症兔Oddi括约肌功能紊乱模型的建立；芍药甘草汤含药兔血清的获取；Oddi 括约肌肌环制作；Oddi括约肌肌细胞获得；掌握了膜片钳技术。阐明了： 高胆固醇血症兔Oddi括约肌肌环出现痉挛，芍药甘草汤对高胆固醇血症兔Oddi括约肌肌环具有解痉和舒张作用；芍药甘草汤能够减少Oddi括约肌肌细胞细胞内的钙离子浓度 。通过ELISA法测定，高胆固醇血症能够引起兔Oddi括约肌肌细胞中IP3浓度升高，含药动物血清、芍药甙和甘草酸能够降低高胆固醇血症兔Oddi括约肌细胞IP3浓度而产生舒张作用；高胆固醇血症明显降低高胆固醇血症兔Oddi括约肌肌细胞Kv4.3通道mRNA和蛋白表达水平，明显升高L型钙通道α1C亚基mRNA和蛋白表达水平；芍药甘草汤可以明显上调高胆固醇血症兔Oddi括约肌细胞Kv4.3通道、BKca通道α亚基、BKca通道β1亚基mRNA和蛋白表达水平，而此作用与芍药甘草汤剂量有一定的依赖性，并且小剂量的芍药甘草汤对Kv4.3通道mRNA和蛋白表达的上调并无明显作用；芍药甙可以明显下调高胆固醇血症兔L型钙通道α1C亚基的mRNA和蛋白表达水平，并呈剂量依赖作用；通过膜片钳，观察到芍药甙可以升高高胆固醇血症兔KV4.3离子通道的电流，降低L型钙离子通道电流，并呈剂量依赖效应，表明各相关离子通道确实参与了高胆固醇血症兔Oddi括约肌功能障碍调控，芍药甘草汤可能通过离子通道途径进而改变细胞内钙离子浓度，舒张Oddi括约肌。.本课题研究了芍药甘草汤调节高胆固醇血症兔Oddi括约肌肌细胞运动及其机制，揭示了高脂血症兔Oddi括约肌肌细胞动力的信号转导机制变化，从离子通道变化的过程对中药的药理作用做出科学解释，为中药芍药甘草汤应用Oddi括约肌功能障碍的治疗、开发提供理论基础..