转录因子MITF调控神经嵴干细胞衍生系增殖与分化的作用机理研究

MITF作为一种重要转录因子在神经嵴干细胞衍生的黑色素细胞增殖与分化与相关疾病中起着作用，但其调控机理未明。根据国内外在这一领域的研究现状，我们假设MITF是通过调控某些下游未知的、复杂的基因和信号网络，在黑色素细胞的生存、增殖与分化中扮演着极其关键的作用。本项目拟采用Mitf突变小鼠作为首选实验系统，运用基因芯片分析，从解析MITF在胚胎黑色素细胞增殖与分化过程中调控的下游靶基因的角度着手，然后对其下游复杂的基因和信号网络进行分析，继而利用RT-PCR或qPCR和RNA原位杂交技术，对筛选差异表达的下游靶基因进行验证，最后通过RNA干扰或基因过表达，对MITF相关下游调节基因在黑色素细胞增殖与分化中的功能机理进行深入研究。通过这一原创性研究，我们可望较为完整地阐明MITF在黑色素细胞增殖和分化中的调控机理，从而为揭示干细胞发育的多潜能性及复杂的增殖与分化调控机制提供崭新的视角和新思路。

MITF是神经嵴干细胞衍生分化的黑色素细胞发育所必需的。本课题采用了Mitf基因敲除小鼠作为疾病模型和神经嵴干细胞衍生分化的黑色素细胞作为首选实验系统，利用了Mitf基因敲除小鼠胚胎、转基因小鼠和胚胎组织ex in vivo 培养方法，对Mitf在黑色素细胞前体发育分化过程中的功能进行了研究；并运用了原代胚胎神经管外植培养和细胞特异性基因转导技术，对Mitf在黑色素细胞分化中的作用进行了分析；然后运用了基因表达谱分析法，对黑色素细胞增殖与分化过程中Mitf的下游靶基因进行了解析；继而通过了RNA干扰和基因过表达技术，对Mitf相关下游调节基因在黑色素细胞增殖分化和迁移中的功能进行了分析。这一原创性研究成果将较为完整地阐明MITF在神经嵴干细胞衍生分化的黑色素细胞分化与发育中的调节机理。