减毒沙门氏菌介导的Apoptin对喉癌的抑制效应研究

抗肿瘤治疗性生物制剂的成功应用不仅取决于其核心物质的抑瘤活性，载体的高效性、靶向性及核心抑瘤物质的特异性也是重要的评价指标。凋亡素（Apoptin）能在不影响正常细胞前提下，特异、高效的诱导肝癌、淋巴瘤、乳腺癌和鳞状细胞癌等多种肿瘤细胞凋亡，且其抑瘤作用不依赖p53，也不受bcl-2等放化疗耐药物质的制约。减毒沙门氏菌是一种高效的基因转导系统，与其它载体系统相比具有靶向肿瘤、特异增殖、低毒、稳定高效表达外源基因及可口服给药等诸多优势。本研究基于我们先前对Apoptin基因的研究，利用减毒沙门氏菌载体系统，构建具有肿瘤特异性杀伤能力和肿瘤特异性增殖功能的重组减毒沙门氏菌，并探讨其对喉癌细胞Hep-2的体外抑制作用和方式，研究其对裸鼠荷人喉癌模型实体肿瘤的抑制效应。为研发安全、靶向、高效、广谱和无耐药的新型抗喉癌基因治疗候选药物奠定物质和理论基础，并为喉癌基因治疗的基础和应用研究积累经验。

有效的肿瘤治疗应该兼顾特异性和安全性。本研究构建了表达凋亡素基因（Apoptin）的减毒沙门氏菌，并利用该重组减毒沙门氏菌感染人喉癌细胞，通过免疫印迹和荧光方法对外源基因Apoptin的表达进行了验证。研究表明，表达Apoptin的重组减毒沙门氏菌能够在不产生明显毒副作用的前提下，通过激活caspase-3诱导人喉癌细胞凋亡。另外，表达Apoptin的重组减毒沙门氏菌诱导人喉癌细胞凋亡的过程中Bax、cytochrome c和caspase-9也起到了关键作用。为进一步探讨表达Apoptin的重组减毒沙门氏菌对体内实体喉癌的抑制作用，本研究建立了裸鼠荷人喉癌动物模型。研究表明，静脉注射表达Apoptin的重组减毒沙门氏菌能够有效迟滞肿瘤生长，降低肿瘤毛细血管密度，延长模型动物生存期。总之，本研究证明表达Apoptin的重组减毒沙门氏菌具有用于治疗喉癌的研究潜质。