SOCS-1负调控核因子κB在树突状细胞介导热应激猪Th1/Th2飘移中的作用机制

Th1/Th2飘移可能是热应激猪对传染性疫病敏感性增高的原因之一，搜寻介导飘移的上游调控网络可望揭示其发生机理。初步设想某些负调控物，阻断TLR信号通路使NF-κB活性降低，从而下调具有T-bet诱导效应的因子表达是热应激猪Th1/Th2飘移的主要原因。本研究拟运用荧光定量PCR、免疫印迹和基因沉默等方法，检测外周血淋巴细胞T-bet、GATA3、IFN-γ和IL-4变化，分析热应激不同时段猪Th1/Th2飘移规律；检测外周血DC细胞SOCS-1表达、Mal降解及NF-κB活性变化，探讨上游负调控网络与飘移的相关性；诱导分化获DC细胞，SOCS-1特异性RNAi载体转染，再热休克处理，检测Mal降解和NF-κB活性，并将上清添加至体外培养的幼稚CD4 T细胞中，分析SOCS-1缺陷对Th1/Th2飘移的影响。从而阐述SOCS-1负调控NF-κB在DC细胞介导Th1/Th2飘移中的作用机制。

Th1/Th2飘移可能是热应激猪对传染性疫病敏感性增高的原因之一，搜寻介导飘移的上游调控网络可望揭示其发生的分子机理。本课题组以在免疫和炎症过程中发挥重要作用的核因子кB为切入点，以免疫印迹、基因沉默、荧光定量、RT-PCR、细胞转染技术和流式细胞术等为技术手段，体内试验与体外实验相互印证，对正向调控物（Toll样受体）和负向调控物（细胞因子信号抑制物1，SOCS-1）在热应激条件下的调控机制及在Th1/Th2飘逸中的作用机制进行了深入研究，发现：① 从基因和蛋白水平探明热应激引起猪CD4 T淋巴细胞亚群Th1向Th2飘逸，Treg向Th17飘逸。这种CD4 T淋巴细胞的“双重失衡”可能是热应激猪免疫抑制的原因之一；② 体外条件下43.5℃/1h 热休克处理，能使IKB发生磷酸化及降解，激活了NF-κB信号通路而上调炎性因子IL-12的表达；③ 以转染HSP70的方法成功构建了基于HSP70高表达的体外热应激模型；④ 提高细胞中HSP70表达能显著活化NF-κB， SOCS1可抑制HSP70介导的NF-κB活化，且这种作用有赖于Mal蛋白的降解；⑤ SOCS1能抑制Th1诱导分化因子GATA3的表达，从而阻断热应激诱发的Th1向Th2飘逸过程。 ⑥ 同SOCS1在热应激调节过程中的作用类似，SOCS2、SOCS3和SOCS4均能抑制HSP70介导的NF-ΚB活化和下游炎性因子的表达，而且这种调控作用的发挥有赖于Mal蛋白的降解。