提插与捻转调控cAMP- - tryptase激发-启动-信息传导-放大级联反应穴敏化特性的手法研究

Acupoint is characteristic as sensitive and proper-stimulation. Acupuncture manipulation is the key point of this transformation which changes the resting statement into functional. Manipulation research has been focused widely but none could show the scientific nature from the view of point-reaction to acupuncture stimulation. Based on our plenty former research, we advance our hypothesis that acupuncture manipulation is a way to arouse the sensitivity of acupoints and cause the reaction of starting-information conducting-amplifying change. It is supposed to choose manipulation as the research object, puncture on the local acupoints, GV16, PC6 of ecchymoma, intracerebral hematoma and ischemia myocardial model rats, observe the epicyte potential change, the expression of c AMP, MAPK, AC, PDE, PKA, which related to the cAMP-tryptase cell signal conducting and the clasmatoblast activation and the tryptase expression inside the local acupoints, explore the corresponding specificity of acupoints sensitivity adjustment and efficacy of different manipulation and the function of promoting blood circulation and removing blood stasis for the local, proximal, distant target organs. This study will try to explore the nature and mechanism of acupuncture manipulation, set up the clinical value and show the scientific connotation, complement and develop the theory of acupuncture manipulation.

腧穴具有敏感性及适宜性刺激特性，由静息态转化为功能态的"穴敏化"而发挥作用，针刺手法是这一转化的关键。针刺手法研究倍受重视，但以往研究均未从穴区对刺激的反应揭示手法的科学本质。在大量研究基础上，提出"针刺手法激发腧穴敏感性，产生启动-信息传导-放大级联性穴敏化反应而发挥作用"这一假说。以提插、捻转这一手法核心要素为研究对象，针刺皮下血肿、脑内血肿和心肌缺血模型大鼠血肿局部、风府和内关腧穴，以细胞膜电位变化、cAMP-tryptase细胞信号传导相关蛋白环磷酸腺苷、促分裂素原活化蛋白激酶、腺苷酸环化酶和磷酸二酯酶、cAMP依赖性蛋白激酶的表达及其对穴区肥大细胞活化、类胰蛋白酶表达这一级联反应为研究内容，探究不同手法调控穴敏化特性及其穴位效应与局部、近部和远部靶器官活血化瘀效应相关特异性。揭示针刺手法实质及机制，阐明科学性内涵，确立手法临床价值和意义。

腧穴具有穴敏性刺激特性，经内部及外部刺激，由静息态转化为功能态的“穴敏化”而发挥作用，刺激是这一转化的关键，针刺腧穴能激发针刺信息并进行启动传导。本课题通过探究腧穴“穴敏性”这一特性的本质发生机制，确立腧穴特性的临床价值和意义。本课题应用转录组测序技术进行了大鼠穴区组织进行基因筛查，确定与针刺信息启动传递密切相关的信号通路，筛选与本研究目标关系密切的通路以及信号通路的差异表达基因进行研究，建立了脑出血及心肌缺血再灌注损伤大鼠模型，针刺脑出血大鼠风府穴与心肌缺血再灌注损伤大鼠内关穴，取穴区局部组织，应用蛋白印迹法（Western-blot）和逆转录聚合酶链式反应技术(RT-PCR)，对大鼠穴区组织以及外周血淋巴细胞进行检测验证分析。结果显示与本研究关系密切的通路主要有：FcεRI信号通路、Toll样受体信号通路、破骨细胞的分化通路、细胞粘附分子通路、趋化因子信号通路等；脑出血模型大鼠风府穴区Fcer1g、TLR2等基因及蛋白与正常组、假手术组大鼠相比较表达水平升高，差异具有统计学意义；心肌缺血再灌注损伤模型大鼠内关穴区TLR2、TLR4等基因及蛋白与正常组，正常针刺组和假手术组大鼠相比较表达水平升高，差异有统计学意义。针刺能降低脑出血模型大鼠风府穴区Fcer1g、TLR2等基因及蛋白的表达，与正常针刺组和假针刺组相比，差异有统计学意义，并且电针组优于手法组。针刺能降低心肌缺血再灌注损伤大鼠内关穴区TLR2、TLR4等基因及蛋白的表达，与正常针刺组和假针刺组相比，差异有统计学意义，本次研究结果，证实腧穴的功能和状态并非是一成不变的，其具有动态性：腧穴有静息态（常态）、反应态和功能态（活态）之分，针刺刺激是激发穴位由“静息态”至“功能态”的关键环节; FcεRI信号通路和Toll样受体信号通路是针刺信息启动传导的重要通路; Fcer1g、TLR2、TLR4等在针刺信息激发启动传导过程中发挥重要作用。