端粒缩短介导肠上皮细胞凋亡参与溃疡性结肠炎相关癌变及四君子汤干预研究

Ulcerative colitis (ulcerative colitis, UC) sustained chronic inflammation associated with ulcerative colitis carcinogenesis (ulcerative colitis associated carcinogenesis, UCAC) occurs, is closely related to development. Preliminary findings, UC presence telomere shortening, increased apoptosis of intestinal epithelial phenomenon, and after Sijunzitang UC intervention can relieve inflammation. The project intends to establish UCAC model train RNA interference hTERT colorectal cancer SW480 cells were affected Sijunzitang intervention, light microscopy and electron microscopy, TUNEL staining, RT PCR, Wstern-blot other methods to detect indicators of colonic mucosa and cell morphology, intestinal epithelial cell apoptosis, telomere length, hTERT activity, TRF1 and TRF2 expression, RNA interference hTERT SW480 colorectal cancer cell apoptosis and telomere-binding protein. From in vivo and in vitro experiments to explore Sijunzitang promote intestinal mucosal barrier repair, relieve UC inflammation, preventing possible mechanism of UCAC, for the elaborate "spleen whom Guardian," the connotation of Chinese medicine, Chinese medicine prevention explore UCAC has important significance.

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）慢性炎症持续与溃疡性结肠炎相关癌变（ulcerative colitis associated carcinogenesis，UCAC）发生、发展密切相关。前期研究发现，UC存在端粒缩短，肠上皮细胞凋亡增加的现象，而四君子汤干预后可缓解溃结炎症。本项目拟建立UCAC模型、培养RNA干扰hTERT大肠癌SW480细胞，观察四君子汤干预的影响，应用光镜及电镜、TUNEL染色、R-T PCR、Wstern-blot等方法，检测指标有结肠黏膜及细胞形态、肠上皮细胞凋亡、端粒长度、hTERT活性、TRF1及TRF2表达、RNA干扰hTERT大肠癌SW480细胞凋亡及端粒结合蛋白表达。从在体及体外实验探讨四君子汤促进肠黏膜屏障修复，缓解UC炎症，防治UCAC的可能作用机制，对于阐述 "脾为之卫"的中医内涵，探索中医药防治UCAC均具有重要意义。

背景：溃疡性结肠炎（UC）易导致溃疡性结肠炎相关癌变（UCAC）。有效控制炎症，可减少或延缓UC的复发，对于防治UCAC的发生发展至关重要。前期研究表明，UC存在端粒长度缩短、TERT表达下降及端粒酶活性下降，此种变化与肠粘膜上皮细胞凋亡加速呈齐同改变。因此推测UCAC可能与端粒酶表达失调密切相关，从调控端粒长度、相关酶的表达为切入点，以减轻肠上皮细胞凋亡、缓解肠道炎症，将是防治UCAC的重要靶点之一。.研究内容：本课题分别从动物实验、细胞实验进行研究。构建UCAC小鼠模型，通过观察结肠组织形态学改变、检测肠上皮细胞凋亡情况和端粒酶活性相关指标，证实四君子汤通过抑制癌细胞增殖防治UCAC的作用。体外培养大肠癌SW480细胞，运用RNA干扰hTERT大肠癌SW480细胞，通过检测细胞凋亡情况、端粒长度及端粒酶活性相关指标，深入探讨四君子汤影响大肠癌细胞SW480的凋亡及自噬的相关环节。.关键数据：动物实验中，与正常组比较，UCAC模型组survivin、hTRET、TANK1表达降低（P < 0.05），caspase-3、TRF1表达升高（P < 0.05）；与模型组比较，四君子汤组survivin、hTRET、TANK1表达升高（P < 0.05），caspase-3、TRF1表达降低（P < 0.05）。细胞实验中，与空白组比较，四君子汤组hTERT、TRF1的mRNA和蛋白表达降低（P < 0.05），Tankyrase的mRNA表达降低，蛋白表达升高（P < 0.05）。RNA干扰hTERT的细胞中，四君子汤组出现细胞自噬现象；与空白组比较，四君子汤组的端粒相对长度缩短，且hTERT的mRNA、蛋白表达均明显降低（P < 0.05）。.重要结果及科学意义：本课题成功复制了UCAC小鼠模型，并证实四君子汤有减缓UCAC炎症反应的作用，具有一定的临床和科研意义。四君子汤可能通过上调survivin、下调caspase-3的表达抑制肠上皮细胞的凋亡，下调hTRET、TRF1、Tankyrase的表达抑制端粒酶的活性，从而防止UCAC。同时，四君子汤也可通过诱导细胞自噬、减缓炎症反应，下调hTRET表达，缩短端粒长度，以抑制癌细胞增殖。因此，四君子汤防治UCAC可在临床中推广使用。