雷公藤内酯醇对耐顺铂人上皮性卵巢癌抑制作用及相关机制研究

Advanced unresectable and chemotherapy-resistant ovarian cancer has become a thorny issue. In recent years we have been exploring the treasure-house of traditional Chinese medicine dig out an effective traditional Chinese medicine to treat these patients with ovarian cancer. Our previous preliminary study found that: low doses of triptolide (TP) can promote epithelial cell apoptosis of human cisplatin-resistant ovarian cancer, animal experiments confirmed that: low doses of TP can inhibit the rat in vivo ovarian cancer growth, and its inhibitory effect and inhibition of the immune function of tumor-bearing rats and 30 times along the platinum. But the mechanism is unknown; PI3K/Akt signaling transduction pathway plays an important role in the malignant cell proliferation, migration and the antagonism of chemotherapy. Accordingly proposed to assume that TP may be blocking the PI3K/Akt pathway and / or to DDP sensitizing effect of anti-cisplatin-resistant ovarian cancer effect. We will further study the effect and TP resistant ovarian cancer, the PI3K/Akt signaling pathway, serum CD4 of CD8 and the transplanted tumor VEGF, the MPP-2 protein expression changes, whether DDP sensitizing effect. Further explore the TP anti-drug-resistant ovarian cancer effect and mechanism of immune function. TP is expected to become the treatment of advanced and resistant to chemotherapy of ovarian cancer drugs or on chemosensitizing provide the experimental basis.

失去手术机会的晚期和耐化疗卵巢癌的治疗已成为棘手问题。近年来我们一直在探索从中药宝库中挖掘出能治疗这些卵巢癌患者的有效中药。我们前期工作研究初步发现：小剂量雷公藤内酯醇(TP)可促进人耐顺铂卵巢癌上皮细胞凋亡，同时动物实验证实：小剂量TP可抑制大鼠体内卵巢癌生长,其抑瘤作用及对荷瘤大鼠免疫功能的抑制作用与30倍顺铂相当。但其机制不明？PI3K/Akt信号转导通路在恶性肿瘤细胞增殖、转移及对化疗的拮抗中起重要作用。据此提出假设，TP可能阻断PI3K/Akt通路和/或对DDP有增敏作用以抗耐顺铂卵巢癌。故我们将进一步研究TP对耐药卵巢癌的作用及作用后PI3K/Akt信号通路、血清CD4+、CD8+及移植瘤VEGF、MPP-2蛋白表达的变化,及是否对DDP有增敏作用。进一步探索TP抗耐药卵巢癌作用及机制和对机体免疫功能的影响。为TP有望成为治疗晚期及耐化疗卵巢癌药物或对化疗增敏提供实验依据。

失去手术机会的晚期和耐化疗卵巢癌的治疗已成为棘手问题。近年来我们一直 在探索从中药宝库中挖掘出能治疗这些卵巢癌患者的有效中药。磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）信号转导通路是一种重要的抗凋亡、促存活的转导途径，具有抑制细胞凋亡和导致细胞增殖等作用。在我们前期工作的基础上，本课题继续延续雷公藤内酯醇对耐顺铂上皮性卵巢癌细胞（SKOV3/DDP）的研究，从体内、体外实验中探讨PI3K/AKT信号通路在TP抑制SKOV3/DDP中的作用，并探讨TP对顺铂产生增敏作用从而抗耐顺铂卵巢癌。体外实验：1．TP和DDP均能诱导SKOV3/DDP细胞凋亡，且0.5ng/ml小剂量TP可以协同增强DDP对SKOV3/DDP细胞凋亡的诱导作用。2．TP诱导SKOV3/DDP细胞凋亡、对DDP增敏作用机制可能与促凋亡蛋白Smac、Caspase-3表达上调，抑凋亡蛋白Survivin表达下降有关。3、TP对SKOV3/DDP细胞的黏附、侵袭和转移能力有明显的抑制作用。4、SKOV3/DDP细胞中p-PI3K与p-Akt蛋白的表达量均分别高于SKOV3细胞中同种蛋白的表达量.siRNA沉默p-Akt基因，下调Akt mRNA的表达，可有效抑制SKOV3/DDP细胞的生长。siRNA沉默p-Akt基因能明显抑制人卵巢癌SKOV3/DDP细胞的增殖活性，阻滞细胞周期在G0/G1期，并且下调Akt在SKOV3/DDP细胞中蛋白的表达.体内实验：1、TP对荷耐顺铂人上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤具有抑制作用。2、TP通过促进IL-2的分泌、抑制TNF-a的分泌而发挥抗肿瘤活性。3、TP通过上调CD4+/CD8+的比值，调节免疫细胞亚群之间的平衡而发挥抗肿瘤活性，且呈时间依赖性。4、TP通过下调VEGF的表达而抑制肿瘤血管的形成、阻止肿瘤细胞侵袭转移。提示TP对荷耐顺铂人上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤PI3K及AKT蛋白表达无影响，但是TP可以抑制荷耐顺铂人上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤P-PI3K及P- AKT蛋白表达。进一步提示TP是通过抑制PI3K及AKT蛋白磷酸化来抑制PI3K/AKT信号通路。TP作用荷耐顺铂人上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤后，移植瘤P-PI3K及P- AKT蛋白呈低水平表达。此项研究为TP治疗晚期及耐化疗卵巢癌药物或对化疗增敏提供实验依据。