小剂量雷公藤多苷对人上皮性耐药卵巢癌抑制作用及机制研究

The treatment of advanced and chemotherapy-resistant ovarian cancer has become a thorny problem, therefore it is significant to seek safe and effective Chinese medicine to defend drug-resistant ovarian cancer. In our previous studies, we found that triptolide(TP)could inhibit the growth of drug-resistant ovarian cancer cell(SKOV3/DDP)and increase its sensibility to cisplatin. However, TP belongs to the lab supplies which cannot be used in clinic. Tripterygium glycosides (GTW), rather than TP, are widely used in clinic to treat immune diseases, and TP is the main active component of GTW. Does GTW have the same inhibiting effect as TP on drug-resistant ovarian cancer? So we continued our previous study and found GTW could significantly enhance sensitivity of SKOV3/DDP cell to cisplatin and inhibit cell invasion and metastasis. But the mechanism is unknown. ILK signaling pathway can mediate epithelial-mesenchymal transition of ovarian cancer and promote invasion and metastasis of ovarian cancer. Accordingly we assume that GTW may block the ILK pathway to inhibit invasion and metastasis of ovarian cancer. So in this study we will establish the drug-resistant ovarian cancer animal model, and check out the effect of low dose of GTW on the tumor size, CA125、HE4 level in serum and the expression of ILK pathway related protein(ILK、slug et al.) in intraperitoneal transplantation tumor tissue. We will study the effect of low dose of GTW on drug-resistant ovarian cancer and its mechanism to provide basic data for low dose of GTW to be an assistant agent or cisplatin sensitization drug in treating advanced or drug-resistant ovarian cancer.

晚期和耐化疗卵巢癌的治疗很棘手，挖掘安全有效的抗耐药卵巢癌中药意义重大。前期我们发现雷公藤内酯醇（TP）可抑制耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP生长，增加卵巢癌细胞的顺铂（DDP）敏感性。TP属实验用品尚未用于临床，是临床上广泛用来治疗免疫性疾病的雷公藤多苷（GTW）的主要活性成分。GTW是否也能抑制耐药卵巢癌？我们前期也发现GTW对SKOV3/DDP细胞有顺铂增敏作用，并能抑制细胞侵袭转移，其机制不明。ILK信号通路能介导卵巢癌上皮间质转化，促进卵巢癌侵袭转移。据此假设：GTW能阻断ILK信号通路抑制耐药卵巢癌侵袭转移。本项目将进一步研究小剂量GTW治疗前后荷癌裸鼠血清CA125和HE4的变化及腹腔移植瘤组织中ILK信号通路相关蛋白ILK、slug等表达的影响，探讨小剂量GTW对耐药卵巢癌细胞的作用及机制；为使小剂量GTW有望成为晚期或耐药卵巢癌的辅助治疗或顺铂增敏药物提供实验依据。

晚期和耐化疗卵巢癌的治疗很棘手，挖掘安全有效的抗耐药卵巢癌中药意义重大。我们前期发现传统中药-雷公藤多苷（GTW）对SKOV3/DDP细胞有顺铂增敏作用，并能抑制细胞侵袭转移，其机制不明。在前期工作的基础上，本研究从体外、体内实验中探讨ILK/AKT/GSK3β/Slug信号通路在小剂量雷公藤多苷对耐顺铂上皮性卵巢癌细胞中的作用，并探讨小剂量雷公藤多苷对顺铂产生增敏作用从而抗耐顺铂卵巢癌的具体机制。体外实验：1、GTW 具有抑制耐顺铂人上皮性卵巢癌细胞 SKOV3/DDP 增殖，诱导细胞凋亡、抑制细胞迁移、侵袭的作用。2、800μg/ml、3200μg/ml GTW 能协同 DDP 抑制 SKOV3/DDP 细胞生长，诱导细胞凋亡，增加 SKOV3/DDP 细胞对顺铂的敏感性，且该作用呈浓度依赖性。 3、小剂量GTW 即能协同 DDP 抑制 SKOV3/DDP 细胞迁移、侵袭，从而发挥顺铂增敏作用。4、GTW 可抑制上皮性耐顺铂卵巢癌A2780/DDP 细胞增殖、迁移和侵袭，并呈时间-剂量依赖关系。5、GTW可协同 DDP 抑制人上皮性耐顺铂卵巢癌 A2780/DDP 细胞增殖、迁移和侵袭，增加A2780/DDP 对顺铂的敏感性。6、GTW通过靶向调控ILK/AKT/GSK3β/Slug信号通路，对耐顺铂卵巢癌A2780/DDP细胞的增殖、迁移、侵袭产生有效抑制。通过靶向调控ILK/AKT/GSK3β/Slug信号通路，EMT相关蛋白E-cadherin的水平上调，N-cadherin、ILK、p-Akt、p-GSK3β和Slug的水平下调，以GTW+DDP组尤为明显，说明GTW可通过ILK/AKT/GSK3β/Slug途径靶向抑制肿瘤细胞的EMT来增强对DDP的敏感性。体内实验：1、GTW治疗后的裸鼠卵巢癌腹腔移植瘤均出现不同程度的减小，其中DDP+GTW组的减小程度最明显。GTW协同DDP可进一步缩小肿瘤体积，降低肿瘤重量。2、GTW，特别是DDP+GTW，可以减缓肿瘤的进展，延长小鼠的存活率，下调肿瘤相关标志物的表达。3、小剂量GTW可通过ILK/AKT/GSK3β/Slug信号通路靶向调控人上皮性卵巢癌耐顺铂作用。此项研究为使小剂量GTW有望成为晚期或耐药卵巢癌的辅助治疗和/或顺铂增敏药物提供实验依据。