脑缺血大鼠脑内AngⅡ及受体在小胶质细胞中的变化研究

血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）是一种多肽类激素，主要有AT1和AT2两种受体。过去的研究显示脑内血管紧张素系统主要在神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞中表达。最近我们的研究首次发现，AngⅡ及其受体也表达于新生大鼠脑内的阿米巴样小胶质细胞（AMC）中，但随发育由AMC转变为静息分支状的小胶质细胞后几乎无AngⅡ及其受体的表达。该项目拟采用大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，应用免疫组化单标和荧光双标、Western blot及real time PCR等技术，观察大鼠脑缺血后激活的小胶质细胞是否如AMC一样，重新表达AngⅡ及其受体，成为脑内血管紧张素系统的一个重要细胞来源，影响炎性因子的分泌，参与脑缺血的病理过程，并对其进行系统的定位、定量研究。为进一步探索小胶质细胞、血管紧张素系统和脑缺血的关系，充分发挥小胶质细胞的保护功能，降低其损害作用，为深入开展相关领域的药物治疗提供一定的实验依据。

血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）是一种多肽类激素，主要有AT1和AT2两种受体。过去的研究显示脑内血管紧张素系统主要在神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞中表达。最近的研究发现，AngⅡ及其受体也表达于新生大鼠脑内的阿米巴样小胶质细胞（AMC）中，但随发育由AMC转变为静息分支状的小胶质细胞后几乎无AngⅡ及其受体的表达。本项目采用大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，应用免疫组化单标和荧光双标、Western blot、real time PCR及ELISA实验方法，观察大鼠脑缺血后激活的小胶质细胞是否如AMC一样，重新表达AngⅡ及其受体，成为脑内血管紧张素系统的一个重要细胞来源，影响炎性因子的分泌，参与脑缺血的病理过程。实验结果证实了本项目中的预先设计，即脑缺血后部分激活的小胶质细胞确实能像它们胚胎时期和生后早期的阿米巴样小胶质细胞那样，重新表达AngⅡ及其受体（AT1和AT2受体），且在损伤后3d-1w表达最强，这与小胶质细胞在缺血后3d、1w激活最明显的时间相符。炎性因子TNF-a和IL-1b在脑缺血后早期显著上调，说明缺血早期由于大量炎性因子的产生，诱发小胶质细胞活化，激活后的小胶质细胞进一步释放炎性因子，并重新表达血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）及AT1和AT2受体，AngⅡ一方面可能通过自分泌方式作用于AT1受体，调节血管张力及脑血流量；另一方面则可能通过介导AT2受体促进细胞生长和分化，参与脑损伤后组织结构的修复，发挥神经保护作用。此外，用氧自由基清除剂—依达拉奉（可抑制激活的小胶质细胞的活性氧蔟和一氧化氮的产生）干预治疗脑缺血后，AngⅡ、AT1和AT2受体以及炎性因子TNF-a和IL-1b的表达均被抑制，缺血半暗区内激活的小胶质细胞数量也明显减少，提示脑缺血后血管紧张素系统在小胶质细胞的表达可能与炎症反应以及氧化应激反应有关。本课题对脑缺血后大鼠脑内血管紧张素Ⅱ及其受体（AT1和AT2）的病理变化进行系统的定位和定量研究；对MCAO大鼠脑内小胶质细胞静息、激活和药物干预三种不同功能状态下，AngⅡ及其受体(AT1和AT2受体)以及炎性因子TNF-a和IL-1b的变化进行不同层面的对比性研究，为探索脑缺血的发病机制、病理变化及有效预防和治疗脑血管疾病提供重要的实验依据，为深入开展相关领域的药物开发奠定基础。