miRNA-218及ZEB2通路调控胰腺癌淋巴转移特性的研究

高淋巴侵袭性是胰腺癌的重要生物学特性，miRNA异常表达与胰腺癌发生发展密切相关，但调控胰腺癌淋巴转移的miRNA尚不明确。我们以基因芯片技术从胰腺癌组织和高淋巴转移潜能细胞系BxPC-3-LN5中同时筛选得到淋巴转移相关的miRNA-218，综合胰腺癌ZEB2的研究和数据库靶点预测，认为miRNA-218可能通过ZEB2-E-cadherin-EMT通路调控胰腺癌淋巴转移。我们拟采用慢病毒转染技术干预miRNA-218，改变ZEB2和E-cadherin表达，研究其对BxPC-3细胞淋巴转移能力的影响；转染ZEB2序列突变质粒以阻断miRNA-218与ZEB2结合，在体内外验证miRNA-218-ZEB2调控通路的作用。本研究通过胰腺癌淋巴转移相关miRNA-218及其通路的研究，以揭示胰腺癌淋巴转移机制，并为miRNA-218和ZEB2靶向的基因治疗提供理论依据和实验基础。

淋巴转移是胰腺癌扩散的主要途径，也是影响患者预后的重要因素。在胰腺癌扩散过程中miRNAs的表达失调已被证实，异常表达的miRNAs可能参与胰腺癌的淋巴转移。我们拟通过本课题研究寻找与胰腺癌淋巴转移密切相关的miRNAs、阐明其功能及调控机制、探讨基因治疗的可行性。. 本课题采用miRNAs芯片以胰腺癌组织和胰腺癌细胞为研究对象，筛选得到了异常表达的miRNA-218，并证实miRNA-218在伴有淋巴结转移的胰腺癌组织中表达降低，在高淋巴转移潜能细胞BxPC-3-LN中表达显著降低。通过上调胰腺癌细胞内miRNA-218的表达，我们发现ZEB2基因的表达无显著变化，而ROBO1基因的表达在转录后水平被抑制，并阐明miRNA-218通过与ROBO1 mRNA的3’非编码区结合而产生负调控的作用机制。上调miRNA-218可抑制胰腺癌细胞的侵袭、迁移和增殖，而通过转染突变型ROBO1基因以拮抗miRNA-218对ROBO1表达的负调控效应，可以逆转miRNA-218对胰腺癌细胞侵袭和迁移的抑制作用，说明ROBO1是miRNA-218调控胰腺癌细胞侵袭、迁移活动的重要靶基因。采用慢病毒转染上调胰腺癌细胞内miRNA-218的表达，建立人胰腺癌淋巴道转移模型，发现在体内miRNA-218的表达上调可抑制胰腺癌的生长和淋巴转移。. 通过本课题研究，我们发现miRNA-218表达下调与胰腺癌淋巴转移相关，阐明了miRNA-218通过在转录后水平特异性结合并负调控ROBO1表达，进而抑制胰腺癌细胞侵袭、迁移的机制，在体内实验中证实恢复miRNA-218的表达可以有效抑制胰腺癌的生长和淋巴转移。