小麦杂交种上调表达基因TaLBD16的功能鉴定及其表达调控网络初步解析

Suppression subtractive hybridization (SSH) had been used to identify the differential expressed gene between hybrid and its two parents, among which, TaLBD16 exhibited upregualtion in hybrid compared two parents. In this study, the main objectives are to figure out how TaLBD16 functions in responsibility to root heterosis in the hybrid cross 3338/6554. Our specific aims are: 1) Obtain he full-lenth cDNA of TaLBD16 from wheat root and detect the tissue-specific expression pattern. 2) Figure out the biological function of TaLBD16 by over-expression in wheat cultivar 3338. 3) Compare the root difference between transgenic line and wild type. 4) Determine the transcriptional and translational expression difference between transgenic line and wild type and identify some genes/proteins showing significant difference. 5) Detect the expression pattern of TaLBD16 and its putative down-stream genes in recombinant isogenic populations and TTC polupations. In summary, the expected data will provide some evidence that TaLBD16 might act as important factor in wheat root heterosis.

课题申请人在前期小麦杂交种和亲本根系转录组表达谱的基础上，筛选到一个在杂交种根系中增加表达的基因TaLBD16。本申请课题将进一步解析TaLBD16与根系杂种优势形成的关系，从基因克隆、差异表达分析、转基因功能鉴定及其调控网络初步解析等不同层次上开展研究，以期为小麦根系杂种优势形成的分子机理提供信息。具体研究内容为：获得小麦TaLBD16基因的全长序列，查明其组织表达特性；获得超表达转小麦植株；查明转基因植株与野生型在根系性状上的差异，找到差异的关键时期；建立TaLBD16超表达株系与野生型之间根系的转录组、蛋白组表达谱，鉴定差异表达的基因/蛋白；完成TaLBD16及其候选下游基因在3338/6554组合重组自交系群体和TTC群体中的表达分析，基本明确TaLBD16与小麦根系性状及其杂种优势形成的关系，并初步提出可能涉及的基因调控网络；发表论文2-4篇，培养研究生2-3名。

课题申请人在小麦杂交种和亲本根系转录组表达谱的基础上，筛选到一个在杂交种根系中增加表达的基因TaLBD16,采用5′RACE以及3′RACE的方法获得该基因的全长cDNA序列，并根据编码的氨基酸序列进行同源进化分析,以小麦不同组织器官包括叶片、根系、根系的不同区段、茎、幼穗、种子等为材料，开展表达分析，发现人工合成六倍体及其亲本根系侧根数目及侧根密度存在明显差异。构建TaLBD16超表达载体.测定转基因株系的根系性状（包括根长、根粗、侧根数目、根体积等）与野生型植株的差异，明确TaLBD16在小麦根系发育过程的作用。以3338/6554重组自交系为材料，检测TaLBD16及其候选下游基因在侧根数目存在差异的不同个体中的表达差异，分析基因差异表达与侧根性状变异的相关性，解析TaLBD16与侧根性状形成的关系。建立了TaLBD16超表达株系与野生型之间根系的转录组表达谱，鉴定差异表达的基因/蛋白,基本明确TaLBD16与小麦根系性状及其杂种优势形成的关系，并初步提出可能涉及的基因调控网络。