高效信号肽构建枯草芽孢杆菌木聚糖酶分泌表达系统筛选

本课题组筛选到一株产碱性木聚糖酶的革兰氏阳性菌株，木聚糖酶产量达到180U/mL。酶学实验表明最适反应条件为50℃,pH 8-9；在pH 9 的条件下，孵育120min 时仍具有75% 的活力。通过菌落形态及16s rDNA序列同源性分析，确定该菌株为短小芽孢杆菌。应用通用引物，PCR（聚合酶链式反应）扩增得到该菌株的木聚糖酶编码基因。为了实现该木聚糖酶的高效分泌表达，在本申请项目中，分别采用诱导型启动子和组成型启动子构建以青霉素G酰化酶成熟肽编码基因和木聚糖酶成熟肽编码基因为报告基因的4个筛选载体， 在枯草芽孢杆菌中进行信号肽的筛选，获得高效的分泌元件。利用筛选得到的分泌元件，构建枯草芽孢杆菌木聚糖酶高效分泌表达载体。转化枯草芽孢杆菌分泌表达宿主（Bacillus subtilis WB700），进行表达效果检验和优化。