簇集素（clusterin）基因在卵巢癌侵袭和转移中的作用及其分子机制探讨

Recently, we found that overexpression of clusterin gene was closely related to tumor invasive and metastatic behavior and was related to the prognosis in ovarian cancer. At present, the molecular mechanism of clusterin gene implicated in the development and progression of ovarian carcinoma is not clear. .In this project, we first investigate the biological behavior of ovarian cancer cell lines, such as in vitro growth, migration, invasion and in vivo tumorigenicity and metastasis after clusterin gene silencing by RNA interference. Then we will confirm the differentially expressed genes involved in ovarian cancer cell through Real-time PCR gene chip detection after clusterin gene silence and thus to screen the closely related potential downstream genes of clusterin and potential signaling pathways; Furthermore, by using gene reverses(downstream gene overexpression, interference, or inhibition of drugs) and combine with gene function test, we aim to prove the downstream genes of clusterin and underling mechanisms. Finally, we will detect the protein expression of clusterin and its downstream gene by immunohistochemistry in ovarian tissue microarray (TMA) and analyze their correlationship with patients clinico-pathological and prognostic features, and therefore to analyze and summarize the molecular mechanismin of clusterin and its clinical oncology significance in the invasive and metastatic process of ovarian cancer.

最近，我们在卵巢癌研究中发现，簇集素（clusterin）基因的过度表达与肿瘤的侵袭和转移及预后密切相关。目前，clusterin基因在卵巢癌发生和浸润转移中的分子致癌机制还很不清楚。.本项目拟首先采用RNA干扰技术，观察clusterin基因沉默后对卵巢癌细胞株体外生长、迁移、侵袭和体内成瘤及转移等生物学行为的影响；通过肿瘤转移相关的RT-PCR芯片检测，确证卵巢癌细胞中clusterin基因沉默后涉及的差异表达基因谱，筛选clusterin密切相关的潜在下游基因和信号传导通路；进一步通过下游基因过表达，干扰或药物抑制等基因回复并结合功能实验，探明clusterin作用的下游基因和机制。最后，应用免疫组化检测clusterin及其下游基因在卵巢癌组织芯片中的蛋白表达及其相关性；结合临床和预后资料，分析和总结clusterin在卵巢癌侵袭和转移中的分子致癌机制和临床肿瘤学意义。

近年的研究发现，Clusterin在许多人类肿瘤如肝癌、肾细胞癌、前列腺癌、卵巢癌等中均出现明显的表达上调，而且其表达水平与肿瘤的浸润、转移和预后密切相关。然而，Clusterin基因在卵巢癌发生发展中所发挥的作用及机制还很不清楚。故此，本项目系统研究了Clusterin基因在卵巢癌侵袭和转移中的作用及其分子机制：首先我们选取Clusterin高表达细胞株OVCAR-3和TOV-21G进行慢病毒介导的Clusterin基因沉默，用western blot检测其干扰效果，并用MTT、细胞划痕实验、transwell侵袭实验、平板克隆形成实验、流式细胞仪等检测Clusterin沉默后，OVCAR-3和TOV-21G细胞在增殖、侵袭和转移等方面的改变。结果发现Clusterin慢病毒干扰载体可有效降低卵巢癌OVCAR-3和TOV-21G细胞Clusterin的蛋白表达水平，并抑制卵巢癌OVCAR-3和TOV-21G细胞的增殖、侵袭和转移，阻碍细胞周期从静止期向合成期发展。提示Clusterin的蛋白表达影响卵巢癌的生物学行为，可作为一个治疗卵巢癌潜在的治疗靶点。随后我们应用 cDNA 芯片技术，检测卵巢癌细胞株中Clusterin基因沉默后的差异基因谱；同时应用western blot确证候选基因蛋白的表达丰度并排除差异表达的假阳性基因后，我们筛选出了Clusterin基因下游潜在的重要靶基因：MMP13。最后，我们将临床上收集的卵巢癌组织标本（包括不同临床分期的卵巢癌，卵巢交界性肿瘤、良性腺瘤和正常卵巢组织）构建组织芯片，根据cDNA 芯片检测结果，对Clusterin及MMP13在正常卵巢和卵巢良恶性肿瘤组织中的蛋白表达进行免疫组化法检测，分析它们之间的相关性，结果发现Clusterin的过度表达对生存有不良的预后趋势；MMP13蛋白高表达与上皮性卵巢癌病理组织分级、FIGO分期呈正相关性；Clusterin和MMP13在上皮性卵巢癌组织中同时高表达是上皮性卵巢癌患者不良预后的独立影响因素，二者结合可以更好的评估上皮性卵巢癌患者的预后。本项目主要研究Clusterin基因在卵巢癌侵袭和转移中的分子致癌机制，使卵巢癌的早期诊断成为可能，同时Clusterin基因可能作为卵巢癌新的潜在治疗靶点位点应用于临床并为进一步评估预后及追踪疗效提供理论依据。