针灸血清激活不同细胞内钙信号传递通路效应规律及机理研究

以体外培养细胞模拟体内活细胞状态为基础，采用细胞学与现代免疫酶联反应、流式细胞检测、分子探针标记等相结合的技术，从形态功能不同的网络联系水平，研究针与灸作用于经络皮部过程中，对神经细胞、肥大细胞和内皮细胞内钙离子信号传递调节效应规律，通过探索神经细胞-免疫细胞（靶细胞肥大细胞）传递到微循环内皮细胞及其相关因子的功能,从而更进一步考究针灸刺激因素对神经细胞、内皮细胞与肥大细胞等在神经血管网络和免疫内分泌网络等联系过程中的作用，揭示针与灸作用经络皮部所触发的相关细胞内及细胞间通路的开关机理，分析针与灸对经络皮部作用过程中神经、肥大和内皮细胞是否为关键细胞，其功能活动与针灸作用的相关性,从而探索细胞内的功能活动与针灸穴位作用的联系。

本课题通过穴区组织匀浆液P物质和内皮素等神经免疫微血管相关物质含量测定、原代培养神经细胞内钙库内质网线粒体活性检测、培养的内皮细胞及肥大细胞内钙库活性检测的四部分动物实验，建立了活细胞与流式共聚焦检测，分子探针标记的技术结合的研究方法思路，初步阐述了针灸刺激作用经络皮部所触发的神经细胞、内皮细胞、肥大细胞内钙库通路的机理。.本课题第一部分神经细胞钙相关机制研究观察到：胃溃疡模型大鼠血清引起神经细胞内钙超载，针刺血清可以抑制原代培养的神经细胞内的钙超载现象，增加钙库内质网和线粒体的活性；施艾灸后,细胞内的钙超载现象、钙库内质网活性没有得到改善，但艾灸有改善线粒体钙库活性的效应。..第二部分内皮细胞内钙调节信号传递效应的实验研究结果显示：溃疡使微血管内皮细胞内钙离子浓度升高，出现了钙超载的现象，模型成功。针刺具有阻抑模型大鼠血清升高内皮细胞内钙离子浓度的作用，艾灸组对内皮细胞内钙超载现象没有改善效应；针和灸均表现出改善内皮细胞内质网线粒体钙库活性的效应。..针灸血清对培养的肥大细胞钙超载的作用效应实验表明:施针与灸血清12小时后，肥大细胞内均未出现钙超载现象，施针与灸血清24h 时对肥大细胞内钙离子浓度没有表现出调节作用，针灸作用可能有时间窗口限制。针和灸均有抑制肥大细胞内质网钙库活性下降的效应，而对肥大细胞线粒体活性下降的现象没有抑制功效。.第四部分研究可见针刺可减少P物质的分泌量，激活穴位效应，艾灸没有表现出效应。针刺有降低穴区组织内皮素产生的功效.艾灸组没有作用。P物质作为神经，内分泌和免疫共同识别的信号分子，其在针刺作用经络皮部中有着重要地位。